試験管内翻訳系を用いたシスタチオニンγ・シンターゼのmRNA安定性制御機構の研究

体外翻译系统研究胱硫醚γ合酶mRNA稳定性控制机制

• 批准号: 04J09242
• 负责人: 櫻井 玲子
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J09242/
• 关键词: シロイヌナズナ; シスタチオニン γ-シンターゼ; mRNA安定性制御機構; S-アデノシルメチオニン; メチオニン; シスタチオニンγ-シンターゼ

シロイヌナズナのシスタチオニンγ-シンターゼ(CGS)は高等植物におけるメチオニン生合成の鍵段階を触媒する.CGSの発現はメチオニンの代謝産物であるS-アデノシルメチオニン(SAM)に応答して負のフィードバック制御を受け,この制御はmRNAの安定性の制御によって行われる.この制御にはMTO1領域と名付けた,CGSの第1エキソンにコードされる十数アミノ酸の配列がシス配列として必要であり,フィードバック非感受性となったシロイヌナズナmto1変異株では,このシス配列内にアミノ酸変異を持つ.SAMの作用機構を調べるため,CGS第1エキソンのコード領域を持つmRNAを試験管内で転写させ,コムギ胚芽抽出液の試験管内翻訳反応での解析を行った.MTO1領域がSAMとの相互作用に関わっているとの作業仮説を立て,放射能標識されたSAM存在下で試験管内翻訳を行うことにより,SAMが翻訳中のリボソームと結合している可能性を検討した.試験管内翻訳反応液中に存在すると考えられるリボソーム分子に対して,制御に効果を示すのに必要なSAMの濃度が数桁高いため,極めてバックグラウンドの高い実験である.遊離のSAMを除去するために,限外ろ過,超遠心等の操作を行った後にフィルターバインディング実験を行った.野生型のmRNA配列を翻訳させた場合の方が,mto1変異を持つmRNAを翻訳させた場合より放射活性が高い傾向が見られたが,有意差を示すには至っていない.遊離SAMの除去方法を検討すると共に,クロスリンクの条件検討を行っている.

This is the most important thing in the world. (CGS) higher plants do not know how to synthesize drugs. CGS shows that there is a problem in the synthesis of chemicals. The mRNA system is stable and stable. It is necessary for CGS to see that there is a problem in the system. In the field of MTO1, you need to make sure that you have a lot of money in the field of MTO1, and that you need to know how to use it in the first half of the year. In the first place of your life, you have to pay for the number of people in the field of MTO1. You need to know that you have a lot of acid, and you need to know that it is necessary to make sure that it is not receptive. You need to know that you have a problem with mto1, and you have to use it. In the first field of CGS, the mRNA device was used to write in the tube, and the germ extract was analyzed in the tube. In the MTO1 field, the SAM interaction in the tube was analyzed, and the radiological label SAM was used in the field. The possibility of the combination of the information in the SAM file and the possibility of the error will be greatly affected. In the anti-flip liquid of the tube, there is a high molecular weight, and the control results show that it is necessary to measure the height of the truss, so as to increase the temperature of the truss. If you are out of the SAM, if you do not have any information, if you do not, if you do so, please do so. The wild type mRNA was arranged to flip, and the mto1 was intended to show that the radioactivity was high, and that it was not intended to show the difference between the two. To remove the method from the SAM, you may need to know that the conditions are different.

项目成果

Nascent peptide-mediated translation elongation arrest coupled with mRNA degradation in the CGS1 gene of Arabidopsis.

拟南芥 CGS1 基因中新生肽介导的翻译延伸停滞与 mRNA 降解相结合。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Genes Dev. 19
• 作者: Tetsuhiro Ogawa;Sakura Inoue;Shunsuke Yajima;Makoto Hidaka;Haruhiko Masaki;K.Takahashi;S.Ohashi-Kumihiro;T. Takayama;H. Onouchi;T. Takayama;H. Onouchi
• 通讯作者: H. Onouchi

Sulfur Transport and Assimilation in Plants in The Post Genomic Era.

后基因组时代植物中的硫转运和同化。

• 发表时间: 2005
• 作者: Neumann G;Noda T;Takada A;Jasenosky LD;Kawaoka Y.;H.Onouchi;Y.Nagami
• 通讯作者: Y.Nagami