权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ナンセンス変異の認識を介したmRNA分解(NMD)活性化機構の解明

通过识别无义突变阐明 mRNA 降解 (NMD) 的激活机制

基本信息

批准号：
04J11724
负责人：
高橋真也
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J11724/
关键词：
mRNA分解 NMD mRNA結合蛋白質 RNA結合蛋白質 mRNA 分解 RNA 結合蛋白質

项目摘要

近年、真核細胞におけるmRNAサーベランス機能のひとつとして、転写・複製中のエラーやスプライシング時のエラーにより生じる不適切な翻訳終結コドン(ナンセンス変異)を含むmRNAを選択的に分解するNMD(Nonsense-Mediated mRNA Decay)経路と呼ばれる監視機構の存在が明らかとなってきた。既存のNMD関連因子は、まず遺伝学的に単離された後に、ナンセンス変異を含むmRNA上に局在し機能することが明らかとなってきたが、分解経路の活性化を担う因子をはじめとしたNMD特異的な制御因子は不明であった。そこで私はNMD経路で分解されるmRNA上の局在を指標とした生化学的手法を用いて、NMD特異的因子の網羅的な単離を試みることにした。モデル生物としては出芽酵母細胞を用いることにした。HIVウイルス由来のmRNA配列特異的なRNA結合蛋白質(姻)認識配列を組み込んだ、正常なレポーター遺伝子と、それにナンセンス変異を含ませた遺伝子の2種類を用意し、それぞれを出芽酵母細胞に導入し、λN蛋白質-レポーターmRNA複合体を免疫沈降した後、SDS-PAGE上で展開し、MARDI TOF-MASSによって蛋白質を単離同定する方法を試みることにした。正常なレポーター遺伝子とナンセンス変異を含むレポーター遺伝子、それぞれを導入した出芽酵母細胞の抽出液からレポーターmRNA-結合蛋白質複合体を単離し、複合体中に含まれる蛋白質の差異を検出した。その結果、ナンセンス変異を含むmRNAに特異的に結合している蛋白質が存在したため、MARDI TOF-MASSを用いて単離同定したところ、Ssal蛋白質であることがわかった。Ssa1のNMD経路への寄与を検討する目的で、Ssal遺伝子の破壊株を作製し、ナンセンス変異を含むmRNAの分解を検出したところ、分解速度が著しく低下していることがわかった。さらに、SsalはUpf因子群と直接的に相互作用することを確認している。これらの結果から、SsalがNMD経路におけるトリガーとなる可能性が高いと考えている。

In recent years, the functions of eukaryotic cells and mRNA have beenて、転WRITING・COPYINGのエラーやスプライシング时のエラーにより生Nonsense-Mediated NMD (Nonsense-Mediated) mRNA Decay) 経路と火ばれるsurveillance agency's existenceが明らかとなってきた. Existing NMD related factorsとが明らかとなってきたが, decomposition 経路のactivation をうfactor をはじめとしたNMD-specific なcontrol factor はUNKNOWN であった. It is a biochemical method that decomposes and decomposes NMD-specific genes, and uses biochemical methods to analyze and analyze NMD-specific factors.モデルbiotics and budding yeast cells are used. The origin of HIV virus and its specific RNA binding protein (mRNA) recognition. Group み込んだ, normal なレポーター伝子と, それにナンセンス変different を contain ませた缝子とIntention of 2 kinds of subtypes, introduction of budding yeast cells into budding yeast cells, immunoprecipitation of λN protein-レポーターmRNA complex, development on SDS-PAGE, MARDI TOF-MASSによってproteinを単同定するmethodをtrialみることにした. Normal なレポーター缝子とナンセンス変different をcontaining むレポーター伝子, それぞれを imported into budding yeast cells The difference between the mRNA-binding protein complex and the protein contained in the complex is the difference between the fluid and the protein. MARDI TOF-MASS uses いて単同定したところ and Ssal protein であることがわかった. Ssa1のNMD経路への信与を検事するpurposeで、Ssal伝子の波壊综合组をmaking的し、ナンセンThe decomposition speed of the mRNA is low and the decomposition speed is low.さらに、SsalはUpf factor group and direct に interaction することをconfirmationしている.これらのRESULTSから、SsalがNMD経路におけるトリガーとなる possibility が高いと考えている.