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広範な昆虫・動物への遺伝子導入を可能とするウイルス介在型LINEの研究

病毒介导的 LINE 研究可将基因转移至多种昆虫和动物

基本信息

批准号：
04J11745
负责人：
川島朋子
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J11745/
关键词：
昆虫転移因子遺伝子導入バキュロウイルス LINE AcNPV

项目摘要

前年度までの二年間では、昆虫のカイコ由来のLINE(non-LTRレトロトランスポゾン)SART1,R1に着目して、昆虫細胞への転移を調べてきた。本年度はその成果を論文にまとめた。また、広範な生物種においてウイルス介在型LINEの応用性を確かめるため、本年度から新しく脊椎動物型のR2というLINEに着目した。近年、魚類のメダカからゲノムデータベースなどの知見をもとに単離されてきたメダカR2は、逆転写酵素ドメインとエンドアーゼドメインからなるORFを1つもつ、自律的な転移因子である。また多くのLINEがランダムに転移するのに対し、メダカR2は染色体上の28SrDNAリピートの特定の塩基配列に転移をする、という標的特異性をもつ。私は、このR2の転移系を開発すれば、昆虫だけでなく、脊椎動物においても、標的特異的な遺伝子導入が可能なのではないかと考え、ウイルス介在型メダカR2の作製を試みた。まずウイルスの選択には、昆虫細胞での研究結果から細胞への毒性を考慮することにした。我々は、脊椎動物細胞に感染はするが、その中で複製できないようなウイルスの使用を考えた。野生型のバキュロウイルスは昆虫によく感染するが、脊椎動物には感染しにくい。そこでバキュロウイルスに、水泡性口内炎ウイルス(VSV)のGタンパク質を発現させ、ヒト細胞に感染するバキュロウイルスのベクターを譲り受け、その中にメダカR2の全長をくみこみ、感染による転移を調べた。Moi500の条件でウイルスを感染させて、その後回収した293細胞のゲノムDNA解析の結果から、およそ96時間後から標的特異的な転移が起きることを確認した。また同様にヒトHeLa細胞にメダカR2組み換えウイルスを感染させた場合、転移は確認することができず、原因を調べた結果、同じ力価のウイルスを感染させても、細胞によって、メダカR2の転写レベルが異なることが原因であることが示唆された。

In the past two years, the LINE(non-LTR) of insect origin and migration of insect cells was modulated by SART1,R1. This year's results are as follows: This year's vertebrate type R2 is the first to appear in the line. In recent years, fish have to change their behavior, change their knowledge, change their behavior, and change their behavior. The most common type of chromosome is the 28S rDNA sequence, which is specific to the chromosome. The development of R2 migration systems in insects, vertebrates, and target-specific gene introductions is possible. The results of the study on insect cells and cell toxicity were considered. We have a study of vertebrate cell infection and replication. Wild-type insects are infected, vertebrates are infected. In addition, the development of vesicular endostomatitis (VSV), the development of vesicular endostomatitis (VSV), the infection of VSV cells, the infection of VSV cells, the length of VSV R2, and the shift of infection. Moi500's condition was confirmed by DNA analysis of 293 cells after 96 days of infection. HeLa cells are infected with the virus, the virus is identified, the cause is determined, the virus is infected, the virus is detected, the virus is detected, the cause is determined.