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神経幹細胞の自己再生、多分化能および生着能におけるサーカディアンリズム機構の解析

神经干细胞自我更新、多能性和植入能力的昼夜节律机制分析

基本信息

批准号：
15700260
负责人：
守屋孝洋
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

Per遺伝子などの時計遺伝子が形成する転写・翻訳のネガティブフィードバックループが、24時間周期の生理リズムを生み出す体内時計の機構であることが明らかになってきた。私は神経幹細胞の自己複製能がPer2の抑制的調節を受け、24時間周期のリズム性を有していることを明らかにしてきた。そこで平成16年度では、Per2による抑制調節の分子機構を明らかにし、生体マウス脳内における神経幹細胞活性の日内リズム性について検討した。胎生15.5日目のマウス線条体よりニューロスフィア法にて神経幹細胞を培養した。増殖因子であるEGFによって増殖刺激を与え、3日間に渡りRNAの抽出を行い、Per2やPer1などの時計遺伝子や細胞周期関連遺伝子の発現量の変化をRT-PCR法にて測定した。また、時計遺伝子Per2のAS投与の影響についても検討した。さらに成体マウス脳内の神経幹細胞自己複製能をBrdU免疫染色法にて検討した。その結果、EGFの刺激により、時計遺伝子Per2とBMAL1遺伝子の発現は3日間にわたり約24時間周期で変動し、またPer2遺伝子AS投与により、神経幹細胞のDNA合成能が上昇することが観察された。しかしながら、Per1や時計遺伝子産物の認識配列であるE-boxを含むサイクリンD1やサイクリンB1、またはWee1は24時間周期の発現変動は認められなかった。一方、成体マウス歯状回顆粒細胞下層に存在する神経幹細胞の自己複製能には、明瞭な日内リズム性が存在することを明らかにできた。以上より、神経幹細胞の自己複製能がPer2やBMAL1などの時計関連遺伝子によって周期的に調節され、特にASによるPer2遺伝子発現低下は、神経幹細胞の効率的な増殖法であることを明らかにすることができ、内在性神経幹細胞の活性も時計遺伝子の支配を強く受けている可能性を示唆できた。

The Per computer is used to measure the number of people in the body. In the 24-hour cycle, the physiological cycle in the 24-hour cycle is recorded in the body. Private users copy their own copies that can be suppressed by Per2, and the 24-time cycle is sensitive. In the year 16, the molecular mechanism of the inhibition of the drug in Pingcheng and the Per2 was clear that the molecular mechanism of the drug, the activity of the cells in the body, the body and the body. The fetus was born for 15.5 days. The body, body and body were born for 15.5 days. The reproductive factors were tested by EGF stimulation, 3 days after RNA extraction, Per2 Per1 assay, cell cycle cycle assay and RT-PCR assay. The Per2 AS vote is similar to that of the real estate market. BrdU immunostaining method was used to replicate the cells themselves in adult animals. The results of the experiment, EGF stimulation, time analysis of Per2 and BMAL1 cycles showed that there were about 24 cycles of activity within 3 days, the AS of Per2 cycles were injected into cells, and the synthesis of DNA was successfully detected by cell cycle monitoring. In this case, the sub-data of Per1 and Wee1 will be assigned to each other, including the operating cycle, and the 24 time cycle. On the one hand, the adult body is in the shape of a grain, and the subcellular cell is capable of replicating itself, knowing that there is intraday sex. The above-mentioned BMAL1 and mythological cell copies can be used to calculate the cycle of the Per2 cycle of the Per2, the Per2 of the special cell is low, and the reproductive method of the cell cycle rate of the supernatant indicates that it is possible to control the activity of the cell and to instigate the possibility of being affected.