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哺乳類リズム遺伝子periodの視交差上核神経細胞イオンチャネル調節機構の解明

哺乳动物节律基因周期在视交叉上核神经元离子通道调控机制的阐明

基本信息

批准号：
11771503
负责人：
守屋孝洋
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

視交差上核を含む急性スライスを用い、受容体刺激薬の局所適用によるピリオド遺伝子の発現変化について、in situ hybridization法によって検討した。まず急性スライスを4%パラホルムアルデヒドで十分固定を行い、フリージングミクロトームを用いて、厚さ20umの脳スライスをもれなく作成し、スライドガラス上に貼り付ける。その後、適切なスライス処理を行い、適切な濃度のプローブを含むハイブリ溶液とインキュベーションすることにより、定量的な時計遺伝子発現の解析を急性スライスを用いた系においても確立することができた。まず、視交差上核を含む急性スライスを、動物飼育室の明期に作製する場合と、暗期に作製する場合でインキュベーションを行ない、一定時間後に脳スライスを還流固定し、時計遺伝子ピリオドの発現の日内リズム性について検討を行なったところ、明期にその発現が高く、暗期に低いという明瞭なリズム性が観察され、in vitroの急性スライス系でも時計遺伝子の自律的振動が持続することが明らかとなった。さらに主観的暗期におけるグルタミン酸やNMDAの投与が急性スライスのPer1遺伝子の発現を上昇させることを明らかにし、光型の同調にグルタミン酸-NMDA受容-Per遺伝子の発現上昇というカスケードが活性化されることを明らかにした。さらに、このシグナル系がin vivoにおいても同様に活性化されるのか検討する目的で、ハムスターの視交差上核にNMDAをマイクロインジエクションした場合の発現の変化を調べたところ、主観的暗期(CT20)の投与によって、Per1およびPer2遺伝子の発現上昇が観察され、その度合いが、光によるものと同程度であった。以上より、カルシウムチャネル活性を有するNMDA受容体が時計遺伝子と密接な関係を有することを明らかにすることができた。

The development of the receptor in the upper nucleus of the optic nerve is studied by the method of situ hybridization. The color of the material is 4% of the color of the material. The color of the material is very fixed. The color of the material is 20 um thick. The color of the material is 20um thick. After the treatment, the appropriate concentration of the solution, the appropriate concentration of the solution, the analysis of the occurrence of the time-consuming agent, the acute treatment of the system, the establishment of the solution, the analysis of the time-consuming agent, the analysis of the occurrence of the time-consuming agent. The core of the inner and outer vision is composed of acute reaction, animal breeding room in the light period, dark period in the middle of the operation, after a certain time in the middle of the operation, the reaction flow is fixed, the time of the reaction is changed, the daytime reaction is changed, the light period in the middle of the operation is changed, the dark period in the middle of the operation is changed, the dark period is changed, the light period in the middle of the operation is changed, the The acute vibration of the vitro is caused by the self-regulation of the time meter. In the dark period of the main phase, the production of Per1 gene increased in the dark period, and the production of Per 1 gene increased in the light period. In addition, the expression of these genes is related to the activation in vivo, the expression in the nucleus of NMDA, the expression in the nucleus of NMDA, the expression in the dark phase (CT20), the expression in the Per1 and Per2 genes, and the expression in the nucleus of NMDA. The NMDA receptor has a time-dependent relationship with the host cell.