RNA結合能を有するGTP結合タンパク質ERAの生理機能解明

阐明具有RNA结合能力的GTP结合蛋白ERA的生理功能

• 批准号: 16770090
• 负责人: 合田 仁
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16770090/
• 关键词: GTP結合タンパク質; ERA; RNA結合タンパク質; アポトーシス; ミトコンドリア

昨年度の当該研究において、ERAはミトコンドリアに局在するGTP結合タンパク質であることが判明した。そこで、本年度はミトコンドリアにおけるERA複合体の同定および昨年度に引き続いてERA欠損マウスの作製を行った。1、ERAを含むタンパク質複合体の精製およびその構成因子の同定FlagおよびHisを付加したERAの安定発現HeLa細胞株を樹立し、その細胞からミトコンドリア粗抽出液を調整した。その後、抗Flag抗体を用いた免疫沈降、Niレジンを用いたアフィニティ精製を行うことで、高精製度のERAタンパク質複合体を得ることに成功した。さらに、その複合体をSDS-PAGEで分離し 複数の複合体構成分子由来のバンドを検出したのち、ゲルよりそれら構成分子を単離し MALDI-TOF-TOF/MSを用いた質量分析を行うことで、ERA複合体構成因子の同定に成功した。その結果、ERAはミトコンドリアでのタンパク質合成や細胞死制御に関与する因子と複合体を形成していることが判明した。2、ERA欠損マウスの作製昨年度、マウスERAゲノムのクローニングを行った。本年度は、Cre-loxP systemを用いたERA遺伝子のコンディショナルターゲッティングベクターを作製した。作製したターゲッティングベクターをマウスES細胞に導入し相同性組み換えを起こさせ、ERAヘテロ欠損ES細胞の樹立に成功した。現在、樹立したES細胞を用いてキメラマウスの作製を行っている。

Last year, this research was carried out on the basis of the research on the quality of GTP combined with the quality of ERA's ERA technology.そこで, this year's ERA complex ERA complex の同定およびlast year's ERA lackluster を行った. 1. ERA contains a refined quality complex and a constituent factor of the ERA, and the flag is added. The stable HeLa cell line of ERA was established and the crude extract of ERA cells was adjusted.その后, いたimmunoprecipitation for anti-Flag antibody, いたアフィニティ for NiレジンをRefined を line う こ と で, high-precision ERA タ ン パ ク quality complex を got る こ と に し た.さらに、そのplexをSDS-PAGEでseparationし のバンドを検出したのち、ゲルよりそれらComponent molecules を単利しMALDI-TOF-TOF/MS has been successfully used for mass analysis and identification of ERA complex constituent factors. As a result, the ERA's cell death control complex was formed and the ERA's cell death control complex was formed. 2. ERA lost the production of マウスの last year, マウスERA ゲノムのクローニングを行った. This year, the Cre-loxP system was produced using the ERA legacy system. Identicality of the production of the ES cells introduced into the ES cells The establishment of tissue replacement and ERA damage ES cells was successful. Now, to establish the ES cells, we will use the ES cells to make them.