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G蛋白質不活性化因子CAPRIのダイナミクスと免疫細胞の応答制御の研究

G蛋白灭活剂CAPRI动力学及免疫细胞反应调节研究

基本信息

批准号：
16790038
负责人：
古野忠秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Aichi Gakuin University (2005)Nagoya City University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

CAPRI(Ca^<2+>-promoted Ras inactivator)はRasGAPとして機能することが知られている。本研究では、マスト細胞株(RBL-2H3細胞)の活性化に及ぼすCAPRIの影響を追究した。蛍光蛋白質CFPとCAPRIのキメラ蛋白質(CFP-CAPRI)は細胞質に存在していたが、抗原刺激に伴う細胞内カルシウムイオン濃度の上昇の直後に細胞膜へ移行し、その後速やかに細胞質へと戻った。CAPRIのGAP-relatedドメインに変異を加えたCFP-CAPRI(R473S)を導入した細胞では、抗原刺激に伴う顕著な移行は確認されなかった。また、CFP-CAPRI発現細胞では脱顆粒がほぼ完全に抑制されるのに対して、CFP-CAPRI(R473S)発現細胞ではほとんど抑制されなかった。さらに、MAPキナーゼ(ERK)の活性化に及ぼすCAPRIの影響を追究した。通常、ERKは抗原刺激の約2分後から核移行を始め、5分後に最大となった後、徐々に核から排出され20分後にはほぼ元の状態に戻るが、CFP-CAPRI発現細胞では、抗原刺激後CFP-CAPRIが形質膜へと移行し、ERKは刺激5分後までは細胞質に存在したままであった。ERKは、その後徐々に核移行し始めたが、15分後に再び細胞質へ戻った。CFP-CAPRI(R473S)発現細胞では、ERKの動態は野生株と同様であった。CFP-CAPRI発現細胞では、抗原刺激5分後のRaf-1、MEK、ERKのリン酸化量が減少していることも見いだした。このようなCAPRIによるERKの初期の活性化の抑制に伴って、TNF-αの産生量が著しく減少することも明らかになった。このことから、CAPRIは抗原刺激に伴って細胞質から形質膜へと一過性に移行して、マスト細胞の脱顆粒およびサイトカインの産生を抑制すると考えられた。

CAPRI (Ca ^ & lt;2+>-promoted Ras inactivator) RasGAP communication machine can help you to know how to do it. In this study, cell lines (RBL-2H3 cells) were "activated" and "CAPRI" were investigated. CFP, CAPRI, protein (CFP-CAPRI), cell cycle, antigen stimulation, cell membrane migration, antigen stimulation, cell membrane migration, cell cycle, cell cycle, cell membrane, cell surface, cell membrane, cell surface, cell membrane, cell membrane, cell surface, cell membrane, cell surface, cell surface, cell membrane, cell membrane, cell surface, cell membrane, cell surface, cell membrane, cell membrane CAPRI GAP-related cells were added with CFP-CAPRI (R473S) cells, and antigen stimulation was accompanied by migration to confirm the infection. The cells were completely suppressed, and CFP-CAPRI (R473S) showed that the cells were suppressed completely. The activities of patients, MAP agents (ERK), and CAPRI patients were investigated. In general, after 2 minutes of ERK antigen stimulation, the beginning of nuclear migration, 5 minutes later, after 5 minutes of maximum stimulation, after 20 minutes of excretion, the morphology of cells, CFP-CAPRI cells, CFP-CAPRI membrane migration, ERK stimulation and 5 minutes of ERK stimulation. After ERK, the transfer of nuclear cells began, and after 15 minutes, the cells were moved again. The wild plants of CFP-CAPRI (R473s) and ERK were found to be the same as each other. After 5 minutes of antigen stimulation, CFP-CAPRI showed that Raf-1, MEK, ERK were acidified and the amount of acidification was reduced. In the early stage of CAPRI, ERK, activation, inhibition, TNF- α, growth, growth and growth. The cells were stimulated by CAPRI antigens, and the cells were activated by CAPRI antigens. Once the cells were transferred, the cells were degranulated, the cells were degranulated, and the inhibition was detected.