G蛋白質不活性化因子CAPRIのダイナミクスと免疫細胞の応答制御の研究

G蛋白灭活剂CAPRI动力学及免疫细胞反应调节研究

基本信息

批准号：
16790038
负责人：
古野忠秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Aichi Gakuin University (2005)Nagoya City University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

CAPRI(Ca^<2+>-promoted Ras inactivator)はRasGAPとして機能することが知られている。本研究では、マスト細胞株(RBL-2H3細胞)の活性化に及ぼすCAPRIの影響を追究した。蛍光蛋白質CFPとCAPRIのキメラ蛋白質(CFP-CAPRI)は細胞質に存在していたが、抗原刺激に伴う細胞内カルシウムイオン濃度の上昇の直後に細胞膜へ移行し、その後速やかに細胞質へと戻った。CAPRIのGAP-relatedドメインに変異を加えたCFP-CAPRI(R473S)を導入した細胞では、抗原刺激に伴う顕著な移行は確認されなかった。また、CFP-CAPRI発現細胞では脱顆粒がほぼ完全に抑制されるのに対して、CFP-CAPRI(R473S)発現細胞ではほとんど抑制されなかった。さらに、MAPキナーゼ(ERK)の活性化に及ぼすCAPRIの影響を追究した。通常、ERKは抗原刺激の約2分後から核移行を始め、5分後に最大となった後、徐々に核から排出され20分後にはほぼ元の状態に戻るが、CFP-CAPRI発現細胞では、抗原刺激後CFP-CAPRIが形質膜へと移行し、ERKは刺激5分後までは細胞質に存在したままであった。ERKは、その後徐々に核移行し始めたが、15分後に再び細胞質へ戻った。CFP-CAPRI(R473S)発現細胞では、ERKの動態は野生株と同様であった。CFP-CAPRI発現細胞では、抗原刺激5分後のRaf-1、MEK、ERKのリン酸化量が減少していることも見いだした。このようなCAPRIによるERKの初期の活性化の抑制に伴って、TNF-αの産生量が著しく減少することも明らかになった。このことから、CAPRIは抗原刺激に伴って細胞質から形質膜へと一過性に移行して、マスト細胞の脱顆粒およびサイトカインの産生を抑制すると考えられた。

Capri（Ca^<2+> - 促进的Ras Inacrivator）被称为RasGap。在这项研究中，我们研究了CAPRI对肥大细胞系（RBL-2H3细胞）激活的影响。荧光蛋白CFP和CAPRI（CFP-CAPRI）的嵌合蛋白存在于细胞质中，但由于抗原刺激引起的细胞内钙离子浓度升高后它们立即迁移到细胞膜，然后迅速返回到细胞质。在用CFP-CAPRI（R473S）转染的细胞中，在CAPRI的间隙相关结构域中没有明显转移。此外，在表达CFP-Capri的细胞中，脱粒几乎完全抑制了，而在CFP-CAPRI（R473S）表达的细胞中，脱粒几乎完全抑制。此外，我们研究了CAPRI对MAP激酶（ERK）激活的影响。通常，ERK在抗原刺激后约2分钟开始核易位，最多达到5分钟，然后从细胞核中逐渐排泄，然后在20分钟后恢复其原始状态。但是，在CFP-CAPRI-表达细胞中，CFP-CAPRI在抗原刺激后迁移到质膜，而ERK一直保持细胞质，直到刺激后5分钟。然后，ERK逐渐开始核能转移，但15分钟后回到了细胞质。在CFP-CAPRI（R473S）表达细胞中，ERK的动力学与野生菌株相似。还发现，在CFP-CAPRI-表达细胞中抗原刺激后，RAF-1，MEK和ERK的磷酸化量减少了。还揭示了随着CAPRI对ERK的早期激活的抑制，TNF-α的产生显着降低。这表明CAPRI在抗原刺激后将Capri瞬时从细胞质转移到质膜，抑制肥大细胞的脱粒和细胞因子的产生。