難治性気道炎症性疾患におけるToll様受容体発現異常とそのメカニズムの解明

解析顽固性气道炎症性疾病中Toll样受体的异常表达及其机制

• 批准号: 16790056
• 负责人: 首藤 剛
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790056/
• 关键词: 嚢胞性線維症(CF); toll-like receptor-2(TLR2); NF-κB; ERストレス; エピジェネティック; DNAメチル化; 5-azacytidine(5-AC); プロモーター; 炎症性疾患; 嚢胞性線維症; toll-like receptor; 気管支上皮細胞; ER overload response; 細胞内シグナル; 遺伝子発現; 炎症性サイトカイン

本研究では,難治性気道炎症疾患嚢胞性線維症(CF)におけるTLR2遺伝子の発現および応答性の上昇とそのメカニズムの解明を種々の方法を用いて行った.CF気道上皮細胞におけるTLR2発現上昇のメカニズムを解明することを目的とし,CF細胞におけるA)NF-κB経路の異常,B)ERストレスの過剰活性化,C)エピジェネティック遺伝子制御機構の破綻などの可能性に関して,種々の分子生物学的検討を行った.上記A)の可能性を検討するため,NF-κB阻害作用を有するIκBαのドミナント変異体を導入し,実験を行った.その結果,CF細胞におけるTLR2の発現上昇には,NF-κBのシグナル伝達経路に異常を来してはいなかった.次に,上記B)の可能性を検討するため,ERストレス誘導剤であるTunicamycin, Thapsigargin, DTTを用いてそのTLR2発現に対する影響を観察したが,全く効果を示さなかったことから,変異CFTR蓄積によるERストレスの過剰活性化は,TLR2発現に関与していなかった。最後に,上記C)の可能性を検討するため,DNA脱メチル化促進剤である5-azacytidine(5-AC)を16HBE14o-に処理したところ,TLR2プロモーター上における脱メチル化が引き起こされ,その遺伝子発現が増強されたことから,気道上皮細胞におけるTLR2の発現はDNAメチル化によって調節されていることが示唆された.さらに,bisulfiteを用いたsequence法により16HBE14o-細胞およびCFBE41o-細胞におけるTLR2プロモーター領域のDNAメチル化を数値化したところ,CFBE41o-細胞において,顕著に脱メチル化されていることを見い出した.これらの結果より,CF患者でみられる慢性気道性炎症は,TLR2のエピジェネティックな発現上昇により引き起こされている可能性が示唆された.

This study で は, refractory 気 嚢 cell sex line d inflammatory disease disease (CF) に お け る TLR2 heritage 伝 son の 発 now お よ び 応 a rising sex の と そ の メ カ ニ ズ ム の interpret を kind 々 の way を with い て line っ た. CF 気 way epithelial cells に お け る TLR2 発 now rising の メ カ ニ ズ ム を interpret す る こ と を purpose と し, CF cells に お け る A) the nf-kappa B 経 road の is unusual, B) ER ス ト レ ス の turning activeness, C) エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ッ ク heritage 伝 sub system of the royal institution flaw の な ど の possibility に masato し て, kind of 々 の of molecular biology 検 を line っ た. Beg す の is written A) possibility を 検 る た め, nf-kappa B resistance against role を have す る I kappa alpha B predominate の ド ミ ナ ン ト - を import し, be 験 を line っ た. そ の results, CF cells に お け る TLR2 の 発 now rising に は, nf-kappa B の シ グ ナ ル 伝 経 road に exception を to し て は い な か っ た. に, written B) possibility の を beg す 検 る た め, ER ス ト レ ス induced tonic で あ る Tunicamycin, Thapsigargin, DTT を with い て そ の TLR2 発 now に す seaborne る influence を 観 examine し た が, full く unseen fruit を shown さ な か っ た こ と か ら, - the accumulation of different CFTR に よ る ER ス ト レ ス の before turning activeness は, TLR2 発 now に masato and し て い な か っ た. Finally に, written in C) の possibility を beg す 検 る た め, DNA メ off チ ル promoting tonic で あ る 5 azacytidine (5 - AC) を 16 hbe14o - に 処 Richard し た と こ ろ, TLR2 プ ロ モ ー タ ー on に お け る メ off チ ル が lead き, scaling こ さ れ, そ の heritage 伝 発 が now son raised strong さ れ た こ と か ら, 気 way Epithelial cells に お け る TLR2 の 発 now は DNA メ チ ル change に よ っ て adjust さ れ て い る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, bisulfite を with い た sequence method に よ り hbe14o - 16 cell お よ び CFBE41o - cell に お け る TLR2 プ ロ モ ー タ ー field の DNA メ チ ル を the numerical change し た と こ ろ, CFBE41o - cell に お い て, 顕 the に メ off チ ル change さ れ て い る こ と を see い out し た. こ れ ら の results よ り, CF patients で み ら れ る chronic inflammation sex は 気, TLR2 の エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ッ ク な 発 now rising に よ り lead き up こ さ れ て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Sp1-dependent regulation of Myeloid Elf-1 like factor in human epithelial cells

• DOI: 10.1016/j.febslet.2005.04.015
• 发表时间: 2005-05-23
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Koga, T;Suico, MA;Kai, H
• 通讯作者: Kai, H

DeltaF508 CFTR pool in the ER is increased by calnexin overexpression

ER 中的 DeltaF508 CFTR 池因钙联蛋白过度表达而增加

• 发表时间: 2004
• 期刊: Mol.Biol.Cell 15
• 作者: Shimohara S;Murakami T;Morikawa M;Matsuo J;Nagayama S;Shuto T;Suico MA;Okiyoneda T;Yamatsu I;Mizushima T;Shimasaki T;Kai H.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.;Suico MA et al.;Lu Z et al.;Suico MA et al.;Okiyoneda T et al.
• 通讯作者: Okiyoneda T et al.

Vitamins K1 and K2 potentiate hyperthermia by down regulating Hsp72 expression in vitro and in vivo.

维生素 K1 和 K2 通过下调体外和体内 Hsp72 表达来增强体温过高。

• 发表时间: 2005
• 期刊: International Journal of Oncology. 6
• 作者: Shimohara;S et al.
• 通讯作者: S et al.

Hyperthermia suppresses the cytotoxicity of NK cells via down-regulation of perforin/granzyme B expression

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.09.184
• 发表时间: 2005-12-02
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Koga, T;Harada, H;Kai, H
• 通讯作者: Kai, H

The ETS Transcription Factor MEF Up-regulates Lysozyme Transcription in Epithelial Cells Through Interaction with PML Protein.

ETS 转录因子 MEF 通过与 PML 蛋白相互作用上调上皮细胞中溶菌酶的转录。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279
• 作者: Suico et al.