死因に関連する骨折の受傷後経過時間推定:免疫組織学的、分子生物学的手法による解析

与死亡原因相关的骨折受伤后经过的时间估计：使用免疫组织学和分子生物学方法进行分析

• 批准号: 16790366
• 负责人: 高宮 正隆
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790366/
• 关键词: 骨折; サイトカイン; 増殖因子; 線溶系; 遺伝子発現; 定量的PCR法; in situ hybridization法; 免疫組織化学

[目的]骨折の受傷後経過時間は法医学的に重要な情報の一つである。我々はこれまで皮膚を中心とした検討を行ってきたが、mRNAは蛋白に先んじて変動しており、外部環境への曝露度が低いほどマーカーの死後保存性は高いことを示唆するデータを得ている。よって骨折試料に分子生物学的手法を導入することにより、骨折後急性期から有用で死後変化に耐えうる診断法の確立が可能であると考えられる。本年度はIL 10、tissue type plasminogen activator(tPA)、urokinase type plasminogen activator(uPA)について検討した。[方法]マウスを用い、Bonnarensらの大腿骨骨折モデルにより骨折を作成した。すなわちハロセンで吸入麻酔後、右大腿骨にL字鋼をあて固定した。さらにこのL字鋼に200gの分銅を高さ20cmのところから衝突させ骨折を作成した。骨折作成後、240時間まで経時的に骨試料を採取し、quantitative PCRを用いて定量的に、またin situ hybridization法を用いて発現部位の経時的変化を検討した。[結果および考察]骨折部位を肉眼的に観察すると骨折作成後144時間後には骨折断端に化骨が形成され、240時間後には骨折断端の肥厚を認めたが、それ以前の期間には変化を認めなかった。IL 10 mRNA発現量は骨折後24時間にピークとなり、組織学的には骨細胞、骨芽細胞、macrophageに発現が認められた。またtPA mRNA発現量は骨折後1時間から24時間後にかけて軽度の上昇があり、72時間後にピークとなり、144から240時間後までの発現量は健常組織と同等であった。一方uPA mRNAには骨折治癒過程における発現量の変動を認めなかった。本検討の結果からIL 10 mRNA、tPA mRNAは骨折後急性期のエイジングに応用可能な因子と考えられた。

[目的]骨折后经过的时间是重要的法医信息之一。我们已经进行了针对皮肤的研究，但是mRNA比蛋白质更有波动，并且数据表明，对外部环境的暴露较低会增加，而标记后的验尸保存越高。因此，人们认为，通过将分子生物学技术引入断裂样品中，可以建立一种诊断方法，该方法可以从裂缝后的急性阶段很有用并承受事后变化。今年，我们讨论了IL 10，组织型纤溶酶原激活剂（TPA）和尿激酶型纤溶酶原激活剂（UPA）。 [方法] Bonnarens等人使用股骨断裂模型使用小鼠创建了裂缝。换句话说，在用卤素吸入麻醉后，将L形钢放在右股骨上并固定。此外，从20厘米的高度与该L形钢相撞200克，产生了断裂。裂缝制备后，随着时间的推移收集骨样品，最高为240小时，并使用定量PCR检查表达位点随时间的变化，并使用定量PCR检查表达位点随时间的变化。 [结果和讨论]当骨折部位严重观察到骨折部位时，在骨折后144小时形成骨折的骨骼，并在骨折树桩处增厚240小时，但在上一时期未观察到任何变化。 IL 10 mRNA表达水平在断裂后24小时达到峰值，并在整骨细胞，成骨细胞和巨噬细胞中表达。此外，TPA mRNA表达水平从骨折后的1到24小时略有增加，在72小时峰值峰值，并且表达水平从144小时到240小时与健康组织的表达水平相当。另一方面，在UPA mRNA中没有观察到骨折愈合过程中表达水平的变化。这项研究的结果表明，IL 10 mRNA和TPA mRNA是可以在裂缝后急性期应用于衰老的因素。

项目成果

Studies on mRNA expression of tissue-type plasminogen activator in bruises for wound age estimation

• DOI: 10.1007/s00414-004-0453-4
• 发表时间: 2004
• 期刊: International Journal of Legal Medicine
• 影响因子: 2.1
• 作者: M. Takamiya;K. Saigusa;R. Kumagai;N. Nakayashiki;Y. Aoki