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神経ガス中毒における標的タンパク質の構造解析と死因解明への応用に関する研究

神经毒气中毒靶蛋白结构分析及其在查明死因中的应用研究

基本信息

批准号：
16790368
负责人：
柘浩一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Research Institute of Police Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、神経ガス曝露を証明する目的で、昨年度のサリンアダクトの分析に引き続き、ヒト血液中のブチリルコリンエステラーゼ-神経ガスアダクトのLC-MS/MSによる分析法を検討した。精製ヒトブチリルコリンエステラーゼ(BuChE)に神経ガスを添加し、アダクトを形成した。SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動の後BuChEに相当する86kDa付近のバンドを切り出し、キモトリプシンを用いてin gel digestionを行い、その後、Micromass Q-TOF2およびAgilent LC-MSD Trapを用いたLC-MS分析を行った。サリン、ソマン、VXアダクトの消化物のLC-MSの結果、m/z1068.5,1054.5,1110.5の抽出イオンクロマトグラム(EIC)上、22.3分、20.1分、26.2分にそれぞれ新たにピークが観測され、アルキルメチルホスホニル化したペプチド断片と認められた。ソマンアダクトについてはm/z1026.5のEIC上、21.9分にもピークが観測され、aging産物であると認められた。MS/MSスペクトルを測定したところ、プレカーサイオンを除いてほぼ同一のフラグメントパターンが得られた。このことから、MS/MS分析のコリジョンに際しては、まずアルキルメチルホスホン酸(またはメチルホスホン酸)部位が脱離することが判明した。ヒト血漿にVXを加え、精製を行った試料からもVX付加ペプチドを検出した。血漿に低濃度のVXを加え部分的にBuChE活性を阻害した試料を作成し、5mLの血漿試料から精製を行った場合に、VXアダクトペプチド断片が検出可能なVXの濃度およびその際の最低検出可能活性阻害度(Minimum Detectable Inhibition Level)を概算したところ、約2×10-8M、1%活性阻害であった。

This year's LC-MS/MS analysis of blood samples for the purpose of demonstrating neurological exposure was discussed. Refine the color of the film and add it to the film. SDS-MS analysis was performed using the SDS-MS Q-TOF2 and Agilent LC-MSD. LC-MS results of the digests of the three groups were m/z 1068.5, 1054.5, 1110.5, 22.3, 20.1, 26.2 points, respectively. Good luck with the EIC at m/z 1026.5, 21.9 minutes, aging products. MS/MS selection criteria are determined by the selection criteria. The analysis of MS/MS was carried out on the basis of the analysis results of MS/MS, and the results of MS/MS analysis showed that MS/MS analysis was carried out on the basis of MS/MS analysis. The plasma was added and refined. The Minimum detectable Inhibition level (MDI) of BuChE activity at low VX concentrations was estimated to be approximately 2×10-8M and 1% activity inhibition at 5mL plasma sample purification.