胎児遺伝子治療の方法論確立のための基礎的研究

建立胎儿基因治疗方法的基础研究

• 批准号: 16790606
• 负责人: 藤木 豊
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790606/
• 关键词: 遺伝子治療; 胎児治療; 子宮内移植; 骨髄移植; サル; 胎児遺伝子治療; 胎児; 妊娠

【結果】(1)カニクイサル胎仔(妊娠期間163日)を用い、細胞の胎仔への移植手技や胎仔解析手技、サル細胞への遺伝子導入手法を検討する基礎実験を施行した。(2)ヒト臍帯血CD34^+細胞3.5x10^6個を妊娠43日のサル胎仔腹腔内に移植した。出生仔のFACSおよびPCRによる解析でヒト由来細胞は同定されなかった。(3)ヒトALL患者有核血球4.2x10^7個を妊娠43日の胎仔へ腹腔内移植した。妊娠114日の胎仔血と生後の新生仔血の解析を施行したが、ヒト細胞は同定されなかった。(4)ヒト臍帯血CD34^+細胞にGFP遺伝子を導入し、1.6x10^6個を妊娠45日の胎仔腹腔内へ移植、妊娠126日に胎仔血を解析し、ヒト細胞は同定できなかった。本胎仔はその後子宮内死亡した。(5)妊娠114日のサル胎仔血を採取しリンパ球にGFP遺伝子を導入、2.7x10^7個を妊娠123日の同サル臍帯血管内に移植した。出生仔からGFPは検出されなかった。(6)妊娠131日のサル胎仔血を採取しリンパ球にGFP遺伝子を導入、1.0x10^5個を妊娠143日の同サル臍帯血中に移植した。出生仔からGFPは検出されなかった。(7)ヒト骨髄CD34^+細胞5x10^6個を妊娠125日、胎仔の臍帯血管に移植、同ヒト骨髄由来リンパ球にBCL-X遺伝子を導入後、これを同胎仔に妊娠135日に3x10^7個、妊娠145日に4x10^6個追加移植した。生後ヒト細胞は同定できなかった。(8)胎仔の父サル骨髄から有核血球4x10^7個を回収し、妊娠156日のメス胎仔に移植、新生仔では父サル由来SRY遺伝子は検出されなかった。【考察】本研究の結果、移植細胞の定着は得られず、また治療遺伝子導入についても不成功であった。レシピエント骨髄中に移植細胞の居場所(niche)が確保されなかったことが一因と考察され、母獣または胎仔に何らかの前処置が必要と考えた。

[Results](1) Basic information on fetal (163 days of gestation) use, fetal cell transplantation techniques, fetal analysis techniques, and fetal cell gene introduction techniques was conducted. (2)3.5x10^6 CD34 + cells from umbilical cord blood were transplanted intraperitoneally into fetuses on day 43 of gestation. FACS and PCR analysis of birth cells (3)All patients had 4.2x10^7 nucleated blood cells and fetal intraperitoneal transplantation on the 43rd day of pregnancy. Analysis of fetal blood on day 14 of gestation and neonatal blood after birth (4)The GFP gene was introduced into the umbilical cord blood CD34 + cells, and 1.6 × 10^6 fetal intraperitoneal transplants were carried out on day 45 of gestation. The fetal blood was analyzed on day 126 of gestation. The fetus died in utero after the birth. (5)Fetal blood from the 114th day of pregnancy was collected and GFP genes were introduced into the balloon, and 2.7x10^7 were transplanted into the umbilical cord blood vessel on the 123rd day of pregnancy. The birth of a child is not easy. (6)1.0x10^5 fetal blood samples collected on day 131 of gestation were transferred to the same fetal blood sample on day 143 of gestation. The birth of a child is not easy. (7)5x10^6 CD34 + cells were transplanted into fetal umbilical vessels on day 125 of gestation, 3x10^7 cells were transplanted into fetal umbilical vessels on day 135 of gestation, and 4x10^6 additional cells were transplanted into fetal umbilical vessels on day 145 of gestation. After birth, the cells are fixed. (8)Fetal father's bone marrow cells 4x10^7 nucleated cells returned to the fetus, 156 days of gestation, fetal transplantation, neonatal father's SRY origin, child's detection and recovery. [Investigation] The results of this study showed that the transplanted cells were stable and unsuccessful, and the introduction of therapeutic genes was unsuccessful. The site of transplantation of cells in the bone marrow is necessary for investigation and treatment of the fetus.