アデノウイルスベクターを用いた造精機能に関わる転写因子DAX1の精巣内遺伝子導入

使用腺病毒载体将参与精子发生的转录因子 DAX1 进行睾内基因转移

• 批准号: 16790923
• 负责人: 小島 祥敬
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790923/
• 关键词: 転写因子; 男子不妊症; 遺伝子導入

1.アデノウイルスベクターの調製昨年に引き続きアデノウイルスベクターの調製から始めたが、昨年発現を確認したはずのCV-1に遺伝子導入したDAX-1蛋白の発現が実はうまくいっておらず再度組み換えアデノウイルスの作製からやり直した。COS-TPC法を利用した組換えアデノウィルス作製キットAdenovirus Expression Vector Kit(TaKaRa Code 6150)を用いて行った。コスミドベクターにDax1遺伝子を含むプラスミドを挿入したのち構造を確認し大量調製を行った。組換えアデノウイルスを作製し、構造を確認したのち力価を測定した。ウイルス液は5%FCS及びペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEMを用い、10^9pfu/mlのウイルス液を10mlに調製した。作製したアデノウイルスベクターをCV-1に遺伝子導入しDax-1蛋白の過剰発現をウエスタンブロティングにより確認した。2.培養細胞への遺伝子導入マウスセルトリ細胞(TM4)を培養しDax-1を遺伝子導入したが、培養細胞への毒性が強いためか、細胞がほとんど死滅した。ウイルス液の濃度を10^6〜10^8pfu/mlまで振って再度培養細胞への遺伝子導入を試みたが、細胞の毒性が強いと判断した。そのため、作製したアデノウイルスベクターに組み込んだプラスミドベクターが良くないと判断し、現在プラスミドベクターのプロモーターを変更し、再度アデノウイルスベクターの作製を試みた。

1. In the last year, I was told that I was in the first place last year. I did not know that I did not know that CV-1 was registered last year. I did not know that I did not know that the DAX-1 protein was present. I did not know that I did not know if I was going to have a problem. The COS-TPC method makes use of the information system to make the Adenovirus Expression Vector Kit (TaKaRa Code 6150) use the information line. Please confirm that there are a large number of Dax1 lines in the system. Make sure that you are able to make sure that the measurement is done. The liquid 5%FCS and