網膜における血管内皮細胞間ギャップの視覚化と血管透過性に対する薬物評価系への応用

视网膜血管内皮细胞间隙的可视化及其在血管通透性药物评价系统中的应用

基本信息

批准号：
17790070
负责人：
中原努
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:本研究の目的は、網膜血管内皮細胞間に形成されるギャップの視覚化ならびにその定量的解析を血管透過性亢進に対する薬物治療の評価系として確立することである。本年度は、コレステロールと同様に心・血管障害のリスクファクターになり得るhomocysteineが網膜血管の透過性を亢進させるという大変興味深い知見を得た。そこで、homocysteineの網膜血管に対する作用に焦点を絞り研究を進めた。方法:麻酔マウスの静脈内にFITC-albumin(100mg/kg)を投与し、15分後にhomocysteine(0.3または1mg/kg, i.v.)を投与した。その45分後にマウスを灌流固定し、眼球を摘出した。網膜を内皮細胞マーカーで蛍光免疫染色した後、FITC-albuminの網膜内分布と網膜血管の走行を蛍光顕微鏡および共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。結果: Homocysteine投与後、網膜内に複数のFITC-albumin漏出部が観察された。FITC-albuminの漏出は、網膜の中心部と末梢部で特に差がなく生じた。Homocysteineは用量依存的にFITC-albuminの漏出部位数を増加させた。一方、漏出面積は用量間で差がなかった。また共焦点レーザー顕微鏡を用いた詳細な観察によりFITC-albuminは網膜の内網状層に分布する毛細血管から漏出し、漏出したFITC-albuminは内網状層から内穎粒層を経て外網状層にも広がることが示された。考察:これらの結果は、血管内皮細胞間ギャップは毛細血管で形成されやすく、形成される血管内皮細胞間ギャップのサイズはほぼ同じであり、homocysteineは、血管内皮細胞間ギャップ形成部位を増加させることにより血管透過性を亢進させることを示唆している。また、漏出した血漿成分が内顆粒層の神経細胞に直接接触し影響を及ぼす可能性も示唆された。今後は、homocysteineが形成するギャップのサイズと数の定量的解析、ギャップ形成機序およびhomocysteineと病態との関連性について研究を進めたい。

目的：这项研究的目的是建立视网膜血管内皮细胞之间形成的间隙和其定量分析，作为评估药物治疗的系统，以提高血管通透性。今年，我们获得了非常有趣的发现，即同型半胱氨酸可能是胆固醇的危险因素，就像胆固醇一样，可以增强视网膜血管的渗透性。因此，我们专注于同型半胱氨酸对视网膜血管的影响。方法：用FITC-Albumin（100 mg/kg）和15分钟后的同型半胱氨酸（0.3或1 mg/kg，i.v.）静脉内静脉内施用麻醉小鼠。 45分钟后，灌注小鼠，并移除眼球。使用内皮细胞标记物对视网膜进行荧光免疫染色后，使用荧光显微镜和共聚焦激光显微镜观察到FITC-Albumin的视网膜内分布和视网膜血管的运行。结果：在施用同型半胱氨酸后，在视网膜中观察到多个FITC-Albumin泄漏部位。在视网膜的中央和外围区域发生了FITC-Albumin的泄漏。同型半胱氨酸以剂量依赖性方式增加了FITC-Albumin中的泄漏位点的数量。另一方面，剂量之间的泄漏区域没有差异。此外，使用共聚焦激光显微镜进行了详细的观察表明，FITC-Albumin从分布在视网膜内部网状层中的毛细血管中泄漏出来，并且泄漏了FITC-Albumin从内部网状层通过网状层扩散到外部网状层。讨论：这些结果表明，血管内皮细胞间隙更可能在毛细血管中形成，并且形成的血管内皮细胞间隙的大小大致相同，并且同型半胱氨酸通过增加血管内皮细胞间隙形成的位点来增强血管通透性。还建议泄漏的血浆成分可以直接接触内部颗粒层中的神经元并影响它们。将来，我们想研究对同型半胱氨酸形成的差异，间隙形成的机理以及同型半胱氨酸与病理学之间的关系进行定量分析。