Wnt-11蛋白質の精製とその生理機能の解析

Wnt-11蛋白的纯化及其生理功能分析

• 批准号: 17790212
• 负责人: 岸田 想子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790212/
• 关键词: Wnt; Frizzled; conditioned medium; シグナル伝達; カラムクロマトグラフィー; β-カテニン; PCP

細胞外分泌蛋白質WntとWntによって活性化される細胞内シグナル伝達経路は種を越えて保存されており、細胞の増殖や分化等の種々の細胞機能を制御する。Wntはヒトやマウスでは19種類、7回細胞膜貫通型のWnt受容体FrizzledはlO種類存在する。WntはFrizzledに結合してシグナルを細胞内に伝えるが、各WntとFrizzledの組み合わせ/特異性については不明な点が多い。これは、Wnt蛋白質の精製が困難であったため、リガンドとして細胞に作用させる際は未精製品(分泌されたWntを含む培養上清:conditioned medium : CM)を使わざるを得ず、純粋なWntの作用を解析することが不可能であったためと考えられる。本年度の成果は以下の通りである。(1)Wnt-5b蛋白質の精製Wnt-5bをCM中に恒常的に分泌するマウスL細胞株を樹立して大量培養し、回収したCMを精製の出発点として、3段階のカラムクロマトグラフィーを行い、Wnt-5b蛋白質を単一標品にまで精製した。精製したWnt-5b蛋白質は、NIH3T3細胞に対してDvlのリン酸化を促進し、Wnt-3aによるTcfの転写活性化を抑制することを見出した。(2)Wnt-7aおよびWnt-7bに対するポリクロナル抗体を作製、精製した。(3)Wnt蛋白質の発現系の確立マウスL細胞においてWnt-11蛋白質やWnt-7b蛋白質を培養上清中に分泌する細胞株を樹立した。Wnt-11 CMがNIH3T3細胞においてJNKのリン酸化を促進することを見出した。今後は、Wnt-11CMを大量培養し、Wnt-11蛋白質の精製を試みる。また、Wnt-7aやWnt-7bの活性を測定する適当なアッセイ系を確立する予定である。

Exocrine proteins Wnt and Wnt are activated to control cellular functions such as cell proliferation and differentiation. There are 19 kinds of Wnt receptors and 7 kinds of Wnt receptors. Wnt Frizzled, Wnt Frizzled The purification of Wnt protein is difficult, and it is impossible to analyze the effect of Wnt protein on cell culture. The results of this year are as follows: (1) Purification of Wnt-5b Protein Wnt-5b is secreted constantly in CM. L cell lines are established, cultured in large quantities, and purified in CM. The purification of Wnt-5b protein is carried out in a single standard. The purified Wnt-5b protein was found to promote the acidification of Dvl in NIH 3T3 cells and inhibit the transcription activity of Tcf in Wnt-3a. (2) Preparation and purification of Wnt-7a and Wnt-7b antibodies. (3) Establishment of Wnt protein production system. Cell lines secreting Wnt-11 protein and Wnt-7b protein in culture supernatant were established. Wnt-11 CM was found in NIH 3T3 cells, which were stimulated by JNK acidification. In the future, Wnt-11CM will be cultured in large quantities, and Wnt-11 protein will be purified. To determine the activity of Wnt-7a and Wnt-7b

项目成果

Expression or wnt-5a is correlatea with aggressiveness of gastric cancer by stimulating cell migration and invasion.

wnt-5a 的表达通过刺激细胞迁移和侵袭与胃癌的侵袭性相关。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Cancer Res. 66
• 作者: Kurayoshi;M.;et al.
• 通讯作者: et al.