カゼインキナーゼIによるWntシグナル伝達調節の分子機構の解析

酪蛋白激酶I调控Wnt信号分子机制分析

• 批准号: 14780492
• 负责人: 岸田 想子
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780492/
• 关键词: Wnt; β-カテニン; Dvl; PKC; リン酸化; カゼインキナーゼ; TRIM3

分泌蛋白質Wntのシグナルは受容体からDvl、GSK-3β、β-カテニン、Tcfへと伝えられ、細胞の分化や増殖を制御するβ-カテニン経路やDvlを介して細胞骨格を制御するPCP経路、Ca^<2+>動員を起こしPKCなどを活性化するCa^<2+>経路に分かれて細胞内で作用すると考えられている。私共を含めた複数のグループが哺乳動物細胞でDvlとCKIの共発現や、Wnt-3aやWnt-5aを含むconditioned mediumの添加により、Dvlのリン酸化が起こることを見出しているが、動物細胞におけるWnt依存性のDvlリン酸化の意義と活性化機構については不明な点が多い。そこで本年度は、Dvlのリン酸化機構を解明するため、Wnt蛋白質を精製することを目的とした。Wnt-3a、Wnt-5a各々を発現するL細胞株とポリクロナル抗体を用意し、Nusseらの方法に準じてconditioned mediumよりカラムクロマトグラフィーを用いて、Wnt蛋白質の精製を試みDvlリン酸化活性を持つ高度に精製した標品の作製に成功した。さらに、L細胞を精製Wnt-3a標品で処理したところ、細胞質内β-カテニンの蓄積が認められ、精製Wnt-5a標品でNIH3T3細胞を処理したころPKCのリン酸化も認められたことから、これらの標品はこれまでに知られているWntの生理活性を維持していることが確かめられた。今後は精製Wnt蛋白質で処理した細胞抽出液から、Dvlリン酸化酵素の同定と精製を試みる予定である。

Secreted protein Wnt のシグナルは receptor からDvl, GSK-3β, β-カテニン, Tcfへと伝えられ, Cell differentiation and proliferation controlするβ-カテニン経路やDvlをIntroduction of cell bone structure, control of PCP, Ca^<2+> mobilization of PKCをActivation of Ca^<2+> is divided into intracellular and intracellular functions and is tested. Private public を めた plural の グ ル ー プ が mammalian cells で Dvl と CKI の common 発 appear や, Wnt-3a や Wnt-5a を contain む conditioned mediumのaddedにより, Dvlのリンacidificationが开こることを见出しているが, animal cells The meaning of Wnt dependence and the activation mechanism of Wnt dependence and acidification of Dvl are unknown.そこでThis yearは, Dvlのリンacidification mechanism を明するため, Wnt protein をrefined することをpurpose とした. Each of Wnt-3a and Wnt-5a is conditioned by the L cell line and the Nusse method. The medium よりカラムクロマトグラフィーを uses いて, Wnt protein のrefined をtest みDvlリン acidification activity をholds つhighly refined したstandard product のproductionした.さらに, L cells are treated with purified Wnt-3a standard products, β-glucosamine accumulation in the cytoplasm is recognized, and purified Wnt-5a standard products are processed in NIH3T3 cells. PKC acidified PKC acidified reagent, これらのstandard product はこれまでに知られているWntのphysiological activityをmaintainしていることが正かめられた. In the future, the purification of Wnt protein and treatment of cell extracts and the purification and testing of Dvl nitric acid enzyme are scheduled to be carried out.