ニパウイルスのリバースジェネティクス系の確立

尼帕病毒反向遗传学体系的建立

• 批准号: 17790302
• 负责人: 米田 美佐子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790302/
• 关键词: ニパウイルス; リバースジェネティクス系; リバースジェネティックス系

本研究の目的はニパウイルスのreverse genetics系を作製し、これをウイルス学的基礎研究およびワクチン開発などの応用研究に有用なツールとして確立することである。平成17年度は、ニパウイルス感染細胞から抽出したRNAをもとに、ウイルスゲノム全長(約19kb)を組み込んだプラスミドおよびウイルスレスキューに必要なN、P、L蛋白を発現するためのプラスミドを作製した。これらのプラスミドを用いて、フランス国立医学研究所(INSERM)のP4施設内でウイルスレスキュー実験を行なった。その結果、遺伝子から感染性ニパウイルスを作出することに世界で初めて成功した。平成18年度には、前年度までに確立したリバースジェネティクス系を用いてEGFP発現ニパウイルスを作出することに成功し、各種細胞への感染性の有無を調べた。その結果、ニパウイルスのリセプターの発現とウイルス増殖の有無が一致しない細胞があることを見いだした。さらに、ウイルスのインターフェロン耐性などへの関与が考えられている、アクセサリー蛋白の機能を解析するため、V,C,Wそれぞれを欠損させたウイルスの作出にも成功した。これら組換えウイルスの性状については、現在解析を行なっている。さらに、ニパウイルスのN,P,M,Lの構造蛋白について大腸菌発現系を作製した。各蛋白にはGSTタグを付加し、このタグを利用して大腸菌のlysateから目的の蛋白を回収精製した。精製した蛋白をウサギに免疫してポリクローナル抗体を作製した。これら抗体は、各蛋白の細胞内動態解析の基礎研究、また感染動物からの抗原の検出やサンドイッチ法での抗体診断等にも役立てられる。本研究成果により、組換えニパウイルスの作製が可能になり、ウイルス学的基礎研究、ワクチン開発などへの応用が期待される。

The purpose of this study is to establish a system of reverse genetics for basic research and development of reverse genetics In 2017, the RNA extracted from infected cells was detected and the total length of RNA (about 19 kb) was determined. The protein expression of N, P and L proteins was controlled. The National Institute of Medicine (INSERT) P4 facility is located in the heart of the city. The result is infectious, and the world is beginning to succeed. In 2018, the establishment of the EGFP system was successful, and the infectivity of various cells was successfully adjusted. The result is that the number of cells in the cell is higher than that in the cell. In addition, it is necessary to analyze the function of the protein in order to improve the quality of the protein. This is the first time I've ever seen a character like this. The structural proteins N, P, M, L and E. coli development system are controlled. Each protein was purified by GST and purified by E. coli lysate. Refined protein is produced by the enzyme. The basic research of antibody, intracellular dynamic analysis of various proteins, detection of antigens in infected animals, and antibody diagnosis have been established. The results of this research are expected to be the basic research and development of science and technology.

项目成果

Expression and characterization of the recombinant swine interleukin-6.

重组猪白细胞介素 6 的表达和表征。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Comp.Immunol.Microbiol.Infect.Dis. 28
• 作者: Nuntaprasert;A. et al.
• 通讯作者: A. et al.

Establishment of a Nipah virus rescue system

• DOI: 10.1073/pnas.0606972103
• 发表时间: 2006-10
• 期刊: Proceedings of the National Academy of Sciences
• 作者: M. Yoneda;V. Guillaume;Fusako Ikeda;Yuki Sakuma;Hiroki Sato-;T. Wild;C. Kai

Host range and receptor utilization of canine distemper virus analyzed by recombinant viruses; involvement heparin-like molecule in CDV infection.

重组病毒分析犬瘟热病毒的宿主范围和受体利用；

• 发表时间: 2006
• 期刊: Virology 359
• 作者: N.Nagata;(Editor Tetsuya Mizutani);Yoneda M.et al.;Fujita K.et al.
• 通讯作者: Fujita K.et al.

Expression and purification of recombinant swine interleukin-4.

• DOI: 10.1016/j.cimid.2004.03.012
• 发表时间: 2005
• 期刊: Comparative immunology, microbiology and infectious diseases
• 作者: A. Nuntaprasert;Y. Mori;Kentaro Fujita;M. Yoneda;R. Miura;Kyoko Tsukiyama-Kohara;Chieko Kai