生体内遺伝子導入法を用いたReg蛋白の全身性投与による膵β細胞の増殖・再生

使用体内基因转移方法全身施用 Reg 蛋白促进胰腺 β 细胞的增殖和再生

• 批准号: 17790613
• 负责人: 及川 洋一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790613/
• 关键词: 膵β細胞の再生; 生体内遺伝子導入; Reg蛋白; 糖尿病; プラスミドベクター

昨年に引き続いて、β細胞特異的な増殖因子であるReg蛋白を遺伝子導入によって糖尿病モデルマウスに全身性に投与し、糖尿病の治療の可能性について検討をおこなった。C57BL/6(8週齢、♂)マウスにstreptozotocin(STZ)を180mg/kg/匹ずつ投与し、4時間絶食後(以下空腹時)血糖500mg/dl程度の糖尿病状態を作成した。同マウスにインスリンの腹腔内投与(0.3U/匹)を併用して空腹時血糖を300mg/dl程度に維持しながら、尾静脈にReg発現ベクター(pASCXA-Reg: n=5、Reg群)あるいは空ベクター(PASC期:n=5、対照群)を100μ9/2ml(生食)ずつ急速静注し、肝臓に遺伝子導入した。その結果Reg群、対照群とも空腹時血糖300〜400mg/dl程度に維持されたが、一部のRe9遺伝子処置マウスでは空腹時血糖が100m9/d1以下となった。血中Reg濃度の違いが血糖降下パターンの違いに寄与した可能性を考え、Reg蛋白定量用の直接法ELISAシステムを構築し、Reg遺伝子導入後の血清Reg濃度の経時的な変化(遺伝子導入前、導入後2日目、同7日目)を評価した。しかし、何れの測定ポイントにおいても血中Reg濃度は測定感度以下であった。Reg遺伝子の導入効率を評価するために、現在遺伝子導入部位(肝臓)におけるReg蛋白の発現を免疫組織化学染色で確認しているが、条件設定の調整を繰り返し行っているところである。また、STZによる膵β細胞への化学的な刺激が、Regによるβ細胞の増殖反応を不安定にしている町能性があるため、1型糖尿病の自然発症モデルであるmDマウスや、インスリン分泌不全に至る2型糖尿病モデルマウスを用いて、Reg遺伝子導入による糖尿病の完治の可能性を追究していく予定である。

In the past year, the introduction of beta cell-specific growth factors, such as Reg protein, has led to the systemic administration of diabetes mellitus, and the possibility of treatment of diabetes mellitus. C57BL/6(8 weeks old) streptozotocin(STZ) In the same way, the intraperitoneal injection (0.3U/p) of the same substance was used to maintain the fasting blood glucose level of 300mg/dl, and the tail vein Reg was found to be in the same group (pASCXA-Reg: n=5, Reg group). The empty space (PASC stage:n=5, control group) was 100μ9/2ml(raw food). The results showed that the fasting blood glucose level of 300 ~ 400mg/dl was maintained, and some of the fasting blood glucose levels were below 100m9/d1. To investigate the possibility of blood Reg concentration deviation from glucose level, to construct a direct ELISA system for Reg protein quantification, and to evaluate the time-dependent variation of serum Reg concentration after Reg gene introduction (before gene introduction, 2 days after gene introduction, and 7 days after gene introduction). The concentration of Reg in the blood was measured below the sensitivity. Reg protein expression was confirmed by immunohistochemical staining at the site of Reg protein introduction (liver), and the condition setting was adjusted. The possibility of complete treatment of diabetes mellitus due to chemical stimulation of beta cells by STZ, Reg, beta cell proliferation and instability, natural development of type 1 diabetes mellitus, and incomplete secretion of beta cells to type 2 diabetes mellitus was investigated.