着床前期胚における甲状腺刺激ホルモンの直接作用に関する検討

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1.TSHの受精卵への直接作用を検討するため、過排卵刺激を行ったマウスを交配させ、2細胞期胚を採取した。得られた2細胞期胚に各濃度のTSHを添加し受精卵の経時的発育を検討した。高濃度のTSHは受精卵の発育を抑制し、特に桑実胚期以降の発育を抑制した。胚盤胞での細胞数計測では、高濃度のTSHは内細胞塊、栄養膜外胚葉層の細胞数をともに減少させた。2.TSHによる受精卵の発育抑制にアポトーシスの発生が関与しているかどうか、caspase-3 assayおよびTUNEL法にて検討したところ、高濃度のTSHは胚盤胞のcaspase-3陽性細胞を増加させ、TUNEL染色細胞を増加させた。従って、高濃度のTSHは胚盤胞のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。3.これらのTSHによる作用が受精卵に発現しているTSHRを介したものかどうかを検討するため、RNAiにより授精卵のTSHRの発現抑制を試みた。RNAiの導入はzygoteへのマイクロインジェクションによって行った。マウスTSHRに対する良い抗体が存在せず、RNAiによるTSHRの発現抑制の検証は、RNAレベルでの定量により行った。RNAiによりTSHR mRNAの発現量が抑制された胚盤胞では、高濃度TSHによる発現抑制・アポトーシス誘導効果が低下した。以上より、高濃度のTSHはその特異的受容体を介して、胚盤胞の発育抑制・アポトーシスの誘導作用を持つことが明らかとなった。