甲状腺刺激ホルモン受容体の分子生物学的解析

促甲状腺激素受体的分子生物学分析

• 批准号: 06671024
• 负责人: 小杉 眞司
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671024/
• 关键词: TSH受容体; cAMP; イノシトール燐酸; G蛋白; プランマー病; 活性化型変異; Nリンク糖鎖; 分子生物学

甲状腺刺激ホルモン(TSH)受容体の細胞膜貫通領域をsite-directed mutagenesisにより変異させ、Cos-7細胞にトランスフェクションして表現実験を行い、非刺激下、TSH・TSAb(バセドウ病甲状腺刺激抗体)刺激下でのcAMP・イノシトール燐酸産生能とTSH結合能の測定およびTSH受容体の一部の合成ペプチドに対する特異抗体を用いたウエスタンブロットによる受容体蛋白の確認を各変異体についておこなった。その結果、第2細胞内ループの中央部(アミノ酸残基525-527;メチオノニンスタート部位を1とした番号)がGsとの相互作用に重要であることが明かとなった。また、Gqとの相互作用については以前報告していた第3細胞内ループの他、第1細胞内ループ全体、第2細胞内ループ、細胞内末尾部のN末側と広く分布していることを明かとした。さらに、細胞外ループについても同様の検討を行い、第3細胞外ループもcAMP系とイノシトール燐酸系の両方のシグナル伝達に重要であることを明かとした。プランマー病に見いだされたTSH受容体の第6細胞膜貫通ヘリックス部の4種類の点変異がいずれも刺激無しで活性化されている、いわゆるconstitutive activationを起こすものであることを表現実験によって示し、疾患の直接の原因となっていることを証明した。また、糖付加部位のミュータジェネシスにより、TSH受容体のアスパラギンリンクの糖鎖には種差があることを明かとした。

Thyroid stimulation ホ モ モ モ (TSH) receptor transmembrane domain をsite-directed Mutagenesis に よ り - different さ せ, Cos 7 cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し て performance be 験 を い, not under the stimulus, TSH TSAb (バ セ ド ウ thyroid stimulating antibody) stimuli で の cAMP, イ ノ シ ト ー ル 燐 acid can produce と TSH binding energy の determination お よ び TSH let body の a の synthesis ペ プ チ ド に す seaborne を る specific antibody with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ る by the capacity of body protein の confirm を - each variant に つ い て お こ な っ た. そ の results, 2 cells ル ー プ の central department (ア ミ ノ acid residues; 525-527 メ チ オ ノ ニ ン ス タ ー ト parts を 1 と し た mash) が Gs と の interaction に important で あ る こ と が Ming か と な っ た. ま た, Gq と の interaction に つ い て は report before し て い た 3 cells ル ー プ の him, 1 intracellular ル ー プ all, 2 cells ル ー プ, at the end of intracellular の N at the end of the lateral と hiroo く distribution し て い る こ と を Ming か と し た. さ ら に, extracellular ル ー プ に つ い て も with others の beg を 検 い, 3 extracellular ル ー プ も cAMP is と イ ノ シ ト ー ル 燐 acid is の struck party の シ グ ナ ル 伝 に important で あ る こ と を Ming か と し た. プ ラ ン マ ー disease に see い だ さ れ た TSH by let body の 6 cell membrane penetration ヘ リ ッ ク ス department four kinds の の - different が い ず れ も stimulation without し で activeness さ れ て い る, い わ ゆ る constitutive Activation を up こ す も の で あ る こ と を performance be 験 に よ っ て の し, disease directly responsible for の と な っ て い る こ と を prove し た. ま た and sugar plus の ミ ュ ー タ ジ ェ ネ シ ス に よ り, TSH by let の ア ス パ ラ ギ ン リ ン ク の sugar lock に は differentiae が あ る こ と を Ming か と し た.

项目成果

小杉眞司、森徹: "TSH受容体研究の最近の動向:構造的特徴とリガンド・自己抗体の結合部位、糖鎖の意義および情報伝達との関係" 日本内分泌学会雑誌. 70. 65-68 (1994)

Shinji Kosugi、Toru Mori：“TSH 受体研究的最新趋势：结构特征、配体和自身抗体的结合位点、糖链的重要性以及与信息传递的关系”日本内分泌学会杂志 70. 65-68 (1994)。

Mori T.et al.: "Recent progress in TSH receptor studies with a new concept of "autoimmune TSH receptor disease"." Endocrine Journal. 41. 1-11 (1994)

Mori T.等人：“TSH受体研究的最新进展，提出了‘自身免疫TSH受体疾病’的新概念。”

赤水尚史 他: "抗TSHレセプター抗体の結合部位;部位特異的変異法による検討" 日本臨床. 52. 1024-1030 (1994)

Naofumi Sekisui 等：“抗 TSH 受体抗体的结合位点；通过定点诱变进行的研究”Nippon Clinical 52. 1024-1030 (1994)

Kosugi S.,et al.: "Possible difference in glycosylation of the thyrotropin receptor among species." Biochem Biophys Res Commun. 200. 1207-1213 (1994)

Kosugi S.等人：“不同物种间促甲状腺素受体的糖基化可能存在差异。”

小杉眞司: "プランマー病のTSH-R遺伝子変異" Modern Physician. (印刷中). (1995)

Shinji Kosugi：“普卢默氏病中的 TSH-R 基因突变”《现代医师》（出版中）。