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Tissue-FISHによる新しいテロメア長測定法の開発と婦人癌早期診断への応用

Tissue-FISH开发新的端粒长度测量方法及其在女性癌症早期诊断中的应用

基本信息

批准号：
17791107
负责人：
毎田佳子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791107/
关键词：
テロメア子宮頚癌子宮体癌

项目摘要

パラフィン切片上の個々の細胞におけるテロメア長をin situにて評価する方法(telo-FISH)を開発し、子宮頚部および子宮内膜の癌化過程におけるテロメア長の変化について検討を行った。1.Telo-FISH法の開発:ホルマリン固定パラフィン包埋切片とCy3ラベルテロメア相補的プローブを用いてin situ hybridizationを行った。Cy3シグナルおよびDAPIの蛍光強度をOpenlabで定量した。個々の細胞について、核内のCy3シグナル値をDAPI測定値で除してtelomere intensity(TI)を計算した。ヌードマウス皮下腫瘍を用いてTelomere Restriction Fragment (TRF) analysisおよびtelo-FISHを行った。TI値とTRFによるテロメア長には有意な正の相関を認めtelo-FISHによりテロメア長の定量的評価が可能であることが示された。2.臨床検体を用いたtelo-FISHによるテロメア長の解析:子宮頸部および子宮内膜について、正常組織/前癌病変/癌病変のtelo-FISHを行った。子宮頸部前癌病変であるCIN1およびCIN2では正常上皮に比べ病変部のTI値が有意に低下していた。CIN3および頸癌のTI値は、正常上皮より短い傾向にあるものの、有意な低下には至らなかった。免疫組織化学染色法による検討では、CIN2およびCIN3の中でもTI値が高い症例にhTERTの発現が強く、子宮頚癌発癌過程においてCIN2-CIN3でのテロメレース活性化とテロメア長回復の様子が示唆された。一方、子宮内膜では前癌病変である内膜増殖症のTI値は正常内膜と有意差がなかった。内膜癌のTI値は正常内膜に比べ低い傾向にあったが、有意差は認めなかった。3.染色体不安定性とテロメア長:染色体17p centromere/subtelomere領域のTissue-FISHを行った。CINでは正常子宮頚部上皮に比べ17pのarm loss/arm gainを示す細胞の比率が有意に高く、染色体の不安定化が示唆された。子宮内膜増殖症では17p arm loss/arm gainの増加は認めなかった。以上より、子宮頚癌では前癌病変におけるテロメア短縮が染色体不安定化を介する癌化に関与していることが示唆された。一方、子宮内膜癌では前癌段階でのテロメア長の明らかな変動は認めず、子宮頚癌・内膜癌の癌化過程におけるテロメア動態の違いが明瞭となった。

Telo-FISH was used to develop and investigate the cell growth in situ on sections of the uterus and endometrial carcinogenesis. 1. Development of Telo-FISH method: Cy3-Cy3-Cy 3 Cy3 and DAPI are quantitative. The DAPI measurement value for each cell and nucleus is calculated in addition to the telomere intensity(TI). Telomere Restriction Fragment (TRF) analysis TRF, TRF 2. Telo-FISH analysis of clinical specimens: cervical and endometrial tissues, normal tissues/precancerous lesions/cancerous lesions CIN1 and CIN2 are lower than TI values in normal epithelium. C3-C4 cervical cancer TI, normal epithelium, short middle tendency, intentional low middle tendency Immunohistochemical staining revealed high TI values for CIN2 and CIN3, high levels of hTERT, high levels of hTERT activity in CIN2 and CIN3, and high levels of hTERT activity in uterine carcinogenesis. One side, endometrium before cancer disease, endometrial hyperplasia TI value, normal endometrium intentionally different Intimal cancer has a tendency to be lower than normal endometrium. 3. Chromosome instability: chromosome 17p centromere/subtelomere domain of Tissue-FISH CIN showed an intentionally high ratio of arm loss/arm gain in normal uterine epithelium compared to 17p, indicating chromosomal instability. Endometrial hyperplasia 17p arm loss/arm gain. The above is a description of the relationship between uterine cancer and precancerous disease. One side, endometrial cancer before the cancer stage, the length of the time, the movement of the time, uterine cancer, endometrial cancer cancer process, the dynamic of the time, the movement of the time.