子宮頚癌に対する光アンチセンス法を用いた新規治療法の開発

利用光反义方法开发宫颈癌新治疗方法

• 批准号: 17791125
• 负责人: 山吉 麻子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791125/
• 关键词: 核酸医薬; 遺伝子治療; アンチセンス; HPV; 子宮頚癌; 光線治療; アポトーシス; p53; ソラレン; 子宮頸ガン

ヒト子宮頚癌組織で90%以上で保存されているヒトパピローマウイルス(HPV)のE6/B7遺伝子領域は、細胞増殖に深く関与していることが報告されている。このうちE6遺伝子は、E7遺伝子のもたらす異常増殖シグナルって活性化されるp53を分解する役割を持つ。本研究では、子宮頸癌細胞で不活化しているp53安定化シグナルを癌細胞に再構築することにより、アポトーシスの誘導を目的としたゲノム創薬を行うことを目的とした。このため、光架橋性分子であるソラレンを核酸の5'水酸基に導入したアンチセンスオリゴDNA(光架橋型AS)を作成し、HPVE6癌遺伝子の選択的発現抑制手段の開発を行った。前年度の研究より、HPV18および16型E6を標的とした光架橋型ASをHPV陽性子宮頚癌細胞株に投与することで、E6蛋白発現の選択的抑制、及び、p53タンパク質の増加を伴ったアポトーシスが誘導されることが確認されている。本年度はこれらを3次元培養系および実験動物系に展開し、i nvivoでの有用性を評価した。子宮頸ガン細胞株をコラーゲンゲル上で3次元培養し、人工子宮頚ガン上皮3次元モデルを作成した。光架橋型ASを導入し、紫外線を照射することで、人工子宮頚ガン上皮層の顕著な減少が認められた。また、光架橋型AS処理した細胞をヌードマウスに移植したところ、配列特異的に造腫瘍性の著しい低下が見られた。以上の結果より、本法がin vivoでも有効であることが示唆された。さらに、GMPグレードの光架橋型AS合成を視野に入れ、アミダイト化ソラレンを用いて自動合成機によりオリゴDNAにソラレン導入したところ、細胞増殖抑制効果など、従来型と遜色ない結果を得た。今後、HPV陽性子宮頚部高度(CIN III)で妊孕性温存を希望する若年患者を対象とした臨床試験を開始し、その安全性及び有効性を評価する。

More than 90% of uterine cancer tissues are preserved in the E6/B7 gene domain, cell proliferation and cell proliferation. The E6 and E7 genes were activated and the p53 gene was decomposed. The aim of this study is to reconstitute cervical cancer cells by activating p53 and inducing it The development of a method for inhibiting the development of HPVE6 oncogene selection by creating DNA(photobridging AS) and photobridging molecules that can be introduced into the 5'-hydroxy group of nucleic acid. Previous studies have confirmed the inhibition of E6 protein expression and the induction of p53 protein expression in HPV positive uterine cancer cell lines when HPV18 and 16 E6 target and photobridging AS. This year, the 3D culture system was developed and evaluated for its usefulness. Cervical cell lines were cultured in 3-dimensional culture and artificial uterine epithelium was prepared in 3-dimensional culture. The light bridge type AS is introduced, ultraviolet rays are irradiated, and the artificial uterus is irradiated. The light bridge-type AS treatment is very effective in preventing the proliferation of cells. The above results show that the law is in vivo. In addition, GMP synthesis of light bridge type AS field of vision, the use of automatic synthesis machine, the introduction of DNA, cell proliferation inhibition effect, the type of inferior results. HPV-positive uterine cervix height (CIN III) is expected to be associated with pregnancy, and clinical trials will be initiated to assess the safety and efficacy of HPV-positive uterine cervix.

项目成果

Effect of cationic comb-type copolymer on quadruplex folding of human telomeric DNA.

阳离子梳型共聚物对人端粒 DNA 四链体折叠的影响。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleoside, Nucleotides ＆ Nucleic Acids (in press)
• 作者: N.Makita;et al.
• 通讯作者: et al.

Synthesis and properties of photo-reactive antisense oligonucleotides containing 2'-O-psoralen-conjugated adenosine

含有2-O-补骨脂素缀合腺苷的光反应反义寡核苷酸的合成和性质

• 发表时间: 2005
• 期刊: Nucleic Acids Symposium Series 49
• 作者: Higuchi;M.;Yamayosni;A.;Kobori;A.;Yamaoka;T.;Murakami;A.
• 通讯作者: A.

Selective photo-cross-linking of 2-O-psoralen-conjugated oligonucleotide with RNAs having point mutations

2-O-补骨脂素缀合寡核苷酸与具有点突变的 RNA 的选择性光交联

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleosides, Nucleotider and Nucleic Acids Vol.26
• 作者: M.Higuchi;A.Yamayoshi;T.Yamaguchi;R.Iwase;T.Yamaoka;A.Kobori;A.Murakami
• 通讯作者: A.Murakami

Discrimination of single nucleotide polymorphisms by strand exchange assay using partially double-stranded probes

使用部分双链探针通过链交换测定区分单核苷酸多态性

• 发表时间: 2005
• 期刊: Nucleic Acid Sym.Ser. 49
• 作者: Goto K;et al.;Itsuki Ajioka;K.Hirata et al.
• 通讯作者: K.Hirata et al.

Characterization of side population cells (SP cells) in human normal endometrial cells.

人类正常子宫内膜细胞中侧群细胞（SP 细胞）的表征。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Human Reproduction (in press)
• 作者: K.Kato;et al.
• 通讯作者: et al.