口腔レンサ球菌の産生する自己溶解酵素Amlに関する研究

口腔链球菌产生自溶酶Aml的研究

• 批准号: 17791302
• 负责人: 藤原 環
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791302/
• 关键词: レンサ球菌; 溶菌酵素; う蝕

Streptococcus mutansの産生する溶菌酵素Amlはう蝕原性細菌に対してのみ溶菌活性を有することから、う蝕予防剤になる可能性を持つ。そこで、Amlの基質特異性を明らかにするため、昨年度Amlの組換えタンパクを作製しその活性について検討を行ってきた。本年度においては結晶構造解析をするためのAmlの大量精製法の確立およびAml欠損変異株の作製を行い、性状解析を行った。1)Amlタンパクの大量精製:His-tag融合Amlを用いて大腸菌を大量培養し、菌体破砕画分を用いてNi-NTAレジンにより粗精製を行った。得られた粗精製画分をphenylカラムによる高速液体クロマトグラフィーによりほぼ均一のタンパクバンドとして回収できた。現在、結晶構造解析に向け大量精製を行っている。2)Amlタンパクの基質結合部位の組換えタンパクの作製・精製:1)の精製タンパクの回収効率が低いため、基質結合部位のみのHis-tag融合タンパクの作製を行った。また、大腸菌の系で精製を1)と同様の方法で行った。回収率も高く、均一のバンドとして精製できた。現在、結晶構造解析用に大量精製を行っている。3)Amlの変異株を作製し、その性状について検討した所、菌体の分離が阻害され非常に長いレンサ状を呈することが観察された。また、この変異株にAmlを作用させることで長いレンサ状がほぼ単菌になった。また、親株にAmlを作用させた所レンサ状から単菌になった。したがって、Amlの生理作用としては菌の分離に関与していることが明らかになった。

The production of Streptococcus mutans by lysozyme Aml is likely to result in the inhibition of lysozyme activity against pathogenic bacteria. The matrix specificity of Aml was investigated in the following ways: This year, the crystal structure analysis of Aml was carried out, and the mass purification method of Aml was established. The production process of Aml was carried out and the character analysis was carried out. 1) Mass purification of Aml:His-tag fusion Aml is used for mass culture of Escherichia coli, cell fragmentation and analysis of Ni-NTA. The resulting coarse and fine paint can be recovered uniformly from the high-speed liquid toner in the phenyl furnace. At present, crystal structure analysis is carried out in large quantities. 2) Preparation and purification of matrix binding site of Aml-1:1) Preparation and purification of His-tag fusion site of matrix binding site of Aml-1:2) Preparation and purification of His-tag fusion site of Aml-1:3) Preparation and purification of His-tag fusion site of Aml-1:4) Preparation and purification of His-tag fusion site of Aml. 1) The same method is used for the purification of Escherichia coli. The recovery rate is high, uniform and refined. Now, crystal structure analysis is used for a large number of refinement. 3) The isolation of Aml from different plants and their characteristics is very difficult to detect. This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. The effect of Aml on the parent plant was similar to that of Aml. The physiological function of Aml is related to the isolation of bacteria.

项目成果

Identification and molecular characterization of an N-acetylmuraminidase, Aml, involved in Streptococcus mutans cell separation

参与变形链球菌细胞分离的 N-乙酰胞壁胺酶 Aml 的鉴定和分子表征

• 发表时间: 2006
• 期刊: Microbiology and Immunology 50・9
• 作者: Yoshimura G;Komatsuzawa H;Hayashi I;Fujiwara T;Yamada S;Nakano Y;Tomita Y;Kozai K;Sugai M.
• 通讯作者: Sugai M.