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神経終末端の膜電位変化によるシナプス伝達修飾機構

神经末梢膜电位变化改变突触传递的机制

基本信息

批准号：
17700366
负责人：
堀哲也
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

SNARE蛋白質機能阻害ペプチドを用いたシナプス伝達効率修飾メカニズムの解明平成18年度は、SNARE蛋白質機能阻害ペプチドを用いたシナブス伝達効率修飾メカニズムの解明ついて、以下の研究を行った。方法:ラットの脳幹横断スライスを作成し(教室備品:スライサー)、シナプス後細胞と巨大シナプス前末端calyx of Heldを水浸対物レンズ(X63)によって直視下同定の後、電気生理学的記録を行った(備品:正立微分干渉顕微鏡)。シナプス後細胞と前末端から同時ホールセル記録を行い(備品:パッチクランプ増幅欝)、前末端に活動電位を誘発し、後細胞からEPSCを記録した。EPSCの振幅をシナブス伝達効率の指標とした。シナブス終末端への巨大分子注入の速度と効率の解析シナブス前末端内に巨大分子を効率よく注入するため、平成18年度は細胞内灌流によって注入される分子の注入量、および注入にかかる時間の定量を行った。終末端パッチクランプ用電極内液の陰イオンを、細胞内潅流により塩素イオンからグルコン酸に置換し、置換にかかる時問及び置換された量を観測した。置換量の同定のため、パッチクランプを適用した終末端にグリシンを局所投与し、終末端グリシン応答の反転電位を経時的に観測した。グルコン酸注入に伴い、グリシン応答反転電位の速やかな移行が観測され、注入開始1分から2分で、約80%〜90%の分子が置換されることが確認された。本実験により、注入分子の濃度をより正確にコントロールし、定量性の高い実験が可能となった。申詰者はシナプス前末端にピペット内灌流により前終末に直接小分子を注入する方法を用いて研究を行ってきたが、この改良により、巨大分子を速やかに前末端内に負荷することが可能になった。ひきつづき、シナプス伝達効率増強におけるSNARE蛋白質の役割とその修飾機構を明らかにする実験を継続する。

SNARE protein functional resistance selection criteria for use in the detection of efficiency modifications, the following research was conducted. Methods: To prepare the transection of stem cells (classroom equipment: stem cells), to prepare the transection of stem cells The activity potential of the anteroterminal and posterior cells was recorded simultaneously. The amplitude of EPSC is the index of its performance. Analysis of the injection rate and efficiency of macromolecules at the end of the cell and quantification of the injection amount and injection time of macromolecules at the end of the cell The terminal electrode is used to measure the amount of anion exchange and intracellular flow in the electrode. The amount of substitution is determined by the application of the terminal phase change potential to the terminal phase change potential. The rate of reaction potential shift was measured at 1 minute to 2 minutes after injection, and about 80% to 90% of the molecules were replaced. This is a good idea, the concentration of injected molecules is correct, the quantification is high, and it is possible. The method of direct injection of small molecules into the anterior terminal of the tumor was studied. SNARE protein activity and modification mechanisms are clearly defined by increased efficiency of SNARE protein expression.