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歯肉線維芽細胞上に発現するHLAクラスII分子の生理的意義の解明

阐明牙龈成纤维细胞表达的 HLA II 类分子的生理意义

基本信息

批准号：
18791594
负责人：
畑中加珠
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791594/
关键词：
シグナル伝達歯肉線維芽細胞 HLAクラスII分子

项目摘要

昨年度,歯肉線維芽細胞(GF)におけるHLAクラスII分子(HLA-II)を介した細胞内シグナル伝達物質として,focal adhesion kinase(FAK)の活性化を確認した。そこで本年度は,1)FAKとHLA-IIとの会合形態,2)サイトカイン産生に至るシグナル伝達へのFAKの影響を検討した。健常人の辺縁歯肉から分離・培養したGFを用い,ヒトIFN-γによって細胞膜上にHLA-IIを発現誘導させた。1)抗HLA-II抗体(L243)が認識するHLA-IIと会合分子複合体を免疫沈降することによって会合分子を得た。IFN-γ処理と未処理のGFから免疫沈降法によって得た画分をSDS-PAGEで分離した後にWestern blotting法でFAKを検出した。同様に,L243にて免疫沈降した画分からFAKおよびリン酸化FAKを検出した。その結果,FAKは共沈降する分子として検出され,またL243でGFを刺激した際に細胞内FAKのリン酸化が増強した。2)L243刺激したGFにおけるFAKのリン酸化がFAK阻害剤(luteolin,quercetin)によって影響を受けるかどうかを,Western blotting法で調べた。luteolinはFAKのリン酸化を抑制したが,quercetinは影響を与えなかった。さらに,培養上清中のサイトカインの量をELISA法で測定すると,luteolinは,L243刺激によって誘導されるGFからのIL-6,MCP-およびRANTESの産生を濃度依存的に抑制した。一般にFAKは,インテグリン(接着分子)の細胞内,ドメインと会合しインテグリンを介してシグナル伝達することが知られている。本研究では,FAKがHLA-IIと直接会合してHLA-IIを介したサイトカイン産生に至るシグナル伝達に関与することが新たに示唆された。

Last year, the activation of focal adhesion kinase(FAK) was confirmed in human embryonic cells (GF) mediated by HLA II molecules (HLA-II). This year, 1)FAK and HLA-II rendezvous patterns, 2) the impact of FAK on HLA-II rendezvous patterns, and 3) the impact of FAK on HLA-II rendezvous patterns. In healthy individuals, HLA-II expression is induced by IFN-γ in cell membranes. 1)Anti-HLA-II antibody (L243) recognizes HLA-II fusion molecule complex and immune system. IFN-γ treatment and untreated GF were detected by SDS-PAGE and Western blotting. In the same way,L243 is immune to FAK and acidified FAK. As a result,FAK co-deposition was detected and intracellular FAK activity increased when L243 was stimulated by GF. 2)L243 stimulated GF to increase FAK concentration and FAK inhibitor (luteolin,quercetin) to decrease FAK concentration. Western blotting method was used to adjust FAK concentration. Luteolin can inhibit FAK acidification,quercetin can inhibit FAK acidification, quer In addition, the production of IL-6,MCP-1 and RANTES in culture supernatant was measured by ELISA. Luteolin stimulated GF and inhibited the production of IL-6,MCP-1 and RANTES in a concentration-dependent manner. Generally FAK is a cell in which molecules (binding molecules) meet in the cell. In this study,FAK was found to be associated with HLA-II direct fusion, and HLA-II was found to be associated with HLA-II direct fusion, and HLA-II direct fusion was found to be associated with HLA-II direct fusion.