脳傷害誘導性神経幹細胞の確立

脑损伤诱导神经干细胞的建立

• 批准号: 18800071
• 负责人: 中込 隆之
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Hyogo College of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18800071/
• 关键词: 神経再生; 脳傷害; 幹細胞; 脳梗塞; 神経幹細胞; マウス

脳梗塞後に内因性神経再生が起こるかどうかを検討する目的で、6〜10週令の雄SCIDマウスを用い、中大脳動脈永久閉塞により、脳梗塞を作成した(J Clin Invest,114:330,2004)。脳組織での神経幹細胞を観察する目的で、1週間目に脳を灌流固定した後、脳梗塞瘢痕部を含む脳切片を作成し、神経幹細胞マーカーであるnestinに対する免疫組織化学を施行した。また、梗塞巣内での神経幹細胞の存在を確認する目的で、1週間後の梗塞瘢痕部のみを取り出し18,23,27ゲージの注射針で物理的に細かくした後にEGF,bFGF,N2存在下DMEM/F12培地で培養することによりneurosphere形成を試みた。その結果、脳梗塞1週間目では脳梗塞瘢痕部及びその周囲に神経幹細胞のマーカーであるnestirr陽性細胞の発現を認めた。一方、培養梗塞瘢痕部からはneurosphere様細胞塊が出現し、培養開始16日後には直径80μm以上の細胞塊が1dishあたり約50個得られた。細胞塊はnestinを発現しており、分化させてRT-PCRで検討したところ、nestin,神経細胞マーカーであるMAP,アストロサイトのマーカーであるGFAP,オリゴデンドロサイトのマーカーであるPLPの発現を認めた。さらに、免疫組織化学でも神経の3系統への分化が確認された。分化した細胞の一部は電気生理学的に機能的な活動電位を有する機能的神経細胞であることも確認された。本研究により、成体神経幹細胞が脳梗塞瘢痕部に存在することが明らかになり、その単離に成功したことから、この幹細胞の脳梗塞治療への応用の可能性が示された。

Internal neurogenesis after infarction is initiated, and 6 to 10 weeks after infarction, male SCID is used, medium and large arteries are permanently damaged, and infarction is created (J Clin Invest,114:330, 2004). For the purpose of tissue examination, 1 week after perfusion fixation, sections containing infarct scars were prepared, and immunohistochemistry was performed for the detection of neurostem cells. Objective: To confirm the existence of neural stem cells in infarct scar. To extract neural stem cells from infarct scar after 1 week, EGF,bFGF and N2 were cultured in DMEM/F12 medium. The results showed that the infarct scar area and the development of Nestir-positive cells in the infarct area were significantly different. One side, culture infarction scar part, neurosphere cell mass appeared, 16 days after the start of culture, cell mass with diameter of 80μm or more, about 50 pieces were obtained. Cell Nestin is detected by RT-PCR, Nestin is detected by MAP, GFAP, PLP is detected by PCR. Immunohistochemical examination of the 3-system differentiation of the nervous system was performed. A part of the differentiation of cells is electrophysiological. The activity potential of cells with electrophysiological functions is confirmed. This study demonstrates the potential of adult neural stem cells for the treatment of infarct scars.

项目成果

Circulating CD34-positive cells provides a marker of vascular risk associated with cognitive impairment

循环 CD34 阳性细胞提供与认知障碍相关的血管风险标记

• 发表时间: 2008
• 期刊: J.Cereb Blood Flow Metab. 28
• 作者: Taguchi;A.;Matsuyama;T.;Nakagomi;T.;et. al.
• 通讯作者: et. al.

脳梗塞後における骨髄単核球移植の脳微小循環向上効果の検討

骨髓单个核细胞移植改善脑梗死后脑微循环的效果观察

• 发表时间: 2007
• 作者: 中山 大輔;藤川 昌敏;中込 隆之;松山 知弘;明神 和紀;田口 明彦;盛 英三
• 通讯作者: 盛 英三

Isolation and characterization of injury-induced neural stem/progenitor cells from post-infarct area in mice

小鼠梗死后区域损伤诱导的神经干/祖细胞的分离和表征

• 发表时间: 2007
• 作者: Nakagomi;T.;Taguchi;A.;Matsuyama;T.;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Granulocyte colony‐stimulating factor has a negative effect on stroke outcome in a murine model

• DOI: 10.1111/j.1460-9568.2007.05640.x
• 发表时间: 2007-07
• 期刊: European Journal of Neuroscience
• 影响因子: 3.4
• 作者: A. Taguchi;Zhongmin Wen;K. Myojin;T. Yoshihara;T. Nakagomi;Daisuke Nakayama;Hidekazu Tanaka;T. So