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ザゼンソウ脱共役タンパク質UCPの試験管内アッセイ系の開発

解偶联蛋白 UCP 体外检测系统的开发

基本信息

批准号：
18880004
负责人：
稲葉靖子
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では発熱植物ザゼンソウの熱産生機構を明らかとするため、ミトコンドリア内膜に局在する脱共役タンパク質UCPの試験管内アッセイ系の開発を行った。UCPはミトコンドリアキャリアファミリーに属する6回膜貫通型のタンパク質で、膜の内外に形成されたプロトン濃度勾配を積極的に解消する過程で熱を出すと考えられている。我々の解析により、これまでザゼンソウで報告された2つのUCP(SrUCPAとSrUCPB)のうち、主として発現しているのはSrUCPA(典型的な植物UCPホモログ)であり、SrUCPB(5回膜貫通型のザゼンソウ型UCP)は検出されなかったため(Ito-Inaba et al., 2008)、SrUCPA-Hisタンパク質の試験管内アッセイ系構築を目指した。まず、SrUCPA-Hisタンパク質を小麦胚芽のライセートを用いて合成し、TALONアフィニティーレジンを用いて精製を行った。併行して、SPQ蛍光試薬を閉じこめたリポソームを調製して、膜を介したプロトンの移動により蛍光レベルが変化する系を構築した。調製したリポソームに精製したSrUCPA-Hisタンパク質を組み込んでSrUCPAを介したプロトン輸送活性の解析を行ったところ、UCP活性のアクチベーターである遊離脂肪酸に依存した蛍光レベルの変化が見いだされたものの、SrUCPAを組み込んでいない場合と比較して、その差はわずかであった。本結果は、SrUCPAタンパク質を精製する過程、或いはプロテオリポソームにSrUCPAタンパク質を再構成する過程で、UCPタンパク質の構造が変化して本来の活性の一部が失われてしまったことによるものと考えている。今後、SrUCPAの機能がより保持された状態でプロテオリポソームに再構成し、アッセイ系の改良を目指していく。

This study focuses on the heat-producing mechanism of heat-generating plants, を明らかとするため, and ミトコンドリThe endometrium is in the test tube of the endometrium UCP. UCP はミトコンドリアキャリアファミリーに is a 6-turn membrane through-type membrane type, membrane type The concentration of internal and external formation is a positive combination of the elimination process and the heat removal process. My analysis report and report on UCP(S) rUCPAとSrUCPB)のうち、主として発appearsしているのはSrUC PA (Typical UCP UCP), SrUCPB (5 times membrane through-type UCP), SrUCPB (Ito-Inaba) et al., 2008), SrUCPA-Historic quality control system construction system.まず、SrUCPA-His タンパクquality をWheat germ のライセートをTALON アフィニティーレジンを is made of いて refined を行った. Parallel, SPQ light test, closed, membraneを开したプロトンのmovable により蛍光レベルが変化するsystem をconstruct した. Modulated したリポソームに refined したSrUCPA-His タンパクquality をgroup み込んでS rUCPA's analysis of transport activity, UCP activity of rUCPAチベーターであるfree fatty acid dependenceした蛍光レベルの変化が见いだされたものの, SrUCPA み込んでいない occasion と comparison して, その Poor はわずかであった. This result is the SrUCPA purification process, or the reconstruction of the SrUCPA purification process.するprocessで、UCPタンパク性のstructuralが変化して本のActivityの一部が无われてしまったことによるものと考えている. From now on, SrUCPA's functional equipment will remain in its original state and will be restructured and improved in the new system.