培養細胞を用いたPMCA法によるヒトプリオンの増幅

使用培养细胞通过 PMCA 方法扩增人朊病毒

• 批准号: 18890017
• 负责人: 小林 篤史
• 金额: $ 1.82万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890017/
• 关键词: プリオン蛋白; アミロイド; 超音波; 神経変性疾患; 脳・神経; 神経科学; 蛋白質; プリオン

本研究ではヒトプリオンのin vitro増幅系を開発することをめざした。まずProtein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA)法の材料として用いるのに適した培養細胞と処理条件およびPMCA条件を検討して、ヒトプリオンの増幅に成功した。増幅は48〜72時間でピークとなるが、その後基質のヒトプリオン蛋白の減少に伴って漸減していった。そのため1ラウンドのPMCA反応の後、新たな基質を加えてさらに反応を行うマルチラウンドPMCAを試みたが、現在のところ持続的な増幅にはいたっていない。次にヒトプリオン蛋白の30ヵ所のアミノ酸についてそれぞれ野生型以外の19種類のアミノ酸へ置換して、増幅効率の向上をめざした。その結果、野生型よりも増幅効率の高くなるアミノ酸変異を同定することができた。本研究は培養細胞を用いたPMCAによってヒトプリオンを増幅した初めての報告である。今後はこの成果を発展させてマルチラウンドPMCAの条件を検討することで、微量のヒトプリオンを高感度に検出することが可能になると考えられる。また培養細胞をベースにしたPMCA法はヒトプリオンだけでなくウシ、ヒツジ、シカなどのプリオン検出にも応用が可能であり、今後も研究開発を続けていく必要がある。

This study is aimed at exploring the possibility of an in vitro amplitude system. Protein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA) method was successfully applied to cell culture under different conditions. The amplitude of the protein increased from 48 to 72 hours, and the protein content of the matrix decreased gradually. The PMCA has been updated and updated. The PMCA is updated and updated. In addition, 30 kinds of amino acid substitutions were found in the wild type, 19 kinds of amino acid substitutions were found in the wild type, and the amplification efficiency was increased. The result is that the wild-type has a high amplification rate and the acid difference is constant. In this study, PMCA was used to culture cells. In the future, the results of PMCA will be developed and discussed in detail. The PMCA method can be used for cell culture and development in the future.

项目成果

Cross-sequence transmission of sporadic Creutzfeldt-Jakob disease creates a new prion strain

• DOI: 10.1074/jbc.m704597200
• 发表时间: 2007-10-12
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Kobayashi, Atsushi;Asano, Masahiro;Kitamoto, Tetsuyuki
• 通讯作者: Kitamoto, Tetsuyuki