濾胞樹状細胞からのプリオン神経侵入経路の解明

阐明滤泡树突状细胞的朊病毒神经侵袭途​​径

• 批准号: 22590922
• 负责人: 小林 篤史
• 金额: $ 2.25万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22590922/
• 关键词: プリオン病; 脳神経疾患; 蛋白質; 脳・神経; ウイルス

プリオン感染防止策を考える上で、末梢からのブリオンの神経侵入経路の解明は大きな課題として残されている。リンパ濾胞の濾胞樹状細胞に集められたプリオンがどうやって末梢神経に侵入するのかを解明することが本研究の目的であった。今回われわれはエピトープ・タグで標識された異常型プリオン蛋白を接種材料にして、末梢感染から神経侵入までのプリオンの動態を免疫組織化学・免疫電顕法により経時的に追跡することを目指した。標識にはプリオン蛋白の異常化に影響を与えることがなく、なおかつ抗体の親和性も高い3F4抗体のエピトープ・タグを用いた。このエピトープ・タグはマウスプリオン蛋白の2ヵ所のアミノ酸をヒトプリオン蛋白の配列に置換するだけで形成される(L108M,V111M)。さらに、3F4抗体での検出系がうまく働かない場合にそなえ、T41抗体のエピトープ・タグ(V214I,Q218E)も用意した。われわれはまず、3F4エピトープ・タグあるいはT41エピトープ・タグを導入したマウスプリオン蛋白を発現するノックインマウスを作製し、これらのノックインマウスにスクレイピープリオンを感染させた際に脳内に蓄積する標識異常型プリオン蛋白が本研究の接種材料として利用できるかを検討した。3F4抗体を用いた免疫組織化学的検索ではオートクレープによる抗原賦活化処理をおこなえば標識異常型プリオン蛋白を検出できることが明らかになった。T41抗体についても同様の条件検討をおこなったところ、やはりオートクレープ処理をおこなった場合のみ異常型プリオン蛋白の検出が可能であった。これらの結果から、エピトープ・タグ標識異常型プリオン蛋白追跡のためにはオートクレープによる抗原賦活化処理が必須であることが明らかになった。しかし、オートクレーブ処理は当初の予定に含まれていた免疫電顕法には適さず、別の手段を講じる必要があることが示唆された。なお本研究課題は平成22年12月15日、研究代表者の休職にともない補助事業の廃止を申請した。

The study of infection prevention strategies in the upper and lower reaches of the nervous system and the solution of major problems The purpose of this study is to clarify the relationship between the proliferation of dendritic cells and the invasion of peripheral neurons. This study identifies abnormal patterns of protein expression in inoculated materials, peripheral infection, and neuronal invasion. Immunohistochemistry and immunohistochemistry are used to track the pattern of protein expression. Identification of abnormal effects of protein and the affinity of antibody 3F4 antibody The protein sequence of the two amino acids in the amino acid sequence of the amino acid sequence of the The detection of 3F4 antibody is the intention of T41 antibody (V214I, Q218E). In this study, the inoculation material was used to detect the abnormal type of protein. Immunohistochemical studies using the 3F4 antibody have made it clear that the antigen activation process in the otoklep can identify abnormal protein types. T41 antibody detection conditions are discussed in this paper. The detection of abnormal protein is possible in this paper. As a result, the protein trace of the abnormal type of protein must be activated. For the first time, the treatment method includes immunoelectrochemistry, and other methods are necessary. This research project was completed on December 15, 2012, and the application for the termination of the research representative's employment was submitted.

项目成果

Experimental Verification of a Traceback Phenomenon in Prion Infection

• DOI: 10.1128/jvi.02387-09
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Kobayashi, Atsushi;Sakuma, Nobuyuki;Kitamoto, Tetsuyuki
• 通讯作者: Kitamoto, Tetsuyuki

Co-Occurrence of Types 1 and 2 PrPres in Sporadic Creutzfeldt-Jakob Disease MM1

• DOI: 10.1016/j.ajpath.2010.11.069
• 发表时间: 2011-03-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY
• 影响因子: 6
• 作者: Kobayashi, Atsushi;Mizukoshi, Kenta;Kitamoto, Tetsuyuki
• 通讯作者: Kitamoto, Tetsuyuki