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コナガバキュロウイルスの特性解析と利用に関する研究

小菜菜杆状病毒的鉴定及利用研究

基本信息

批准号：
06F06428
负责人：
小林迪弘
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

コナガ由来のPlxy1217細胞を用いて研究を進めた。Plxy1217細胞は、恵与を受けた当初の継代数は多くなかったために樹立細胞系とはいえず、また市販されていない栄養豊富な特殊な培養液で継代されていたので、汎用性を高める目的もあって、まず、市販のIPL-41培養液で継代することによって、IPL-41培養液に順化させた細胞系として樹立した。樹立したPlxy1217細胞系に感染幼虫から調製したPlxyNPV接種液を接種したところ、NPV感染に典型的なCPEと包埋体様封入体の形成が認められた。この感染細胞の培養液中のPlxyNPVのプラーク純化を、Plxy1217細胞を用いて試みたところ、12の分離株において、ウイルス接種後14日頃からプラークが認められた。これらのプラークに含まれるPlxyNPVを培養液中に採取して接種液とし、Plxy1217細胞に接種したところ、いずれのプラークも、明瞭な包埋体の形成は示さなかったが、感染細胞から包埋体を粗精製して、包埋体の構成たんぱく質であるポリヘドリンをイムノブロット法により検出したところ、いくつかのプラークで、ポリヘドリンが約28kDaのバンドとして明瞭に認められた。このことから、プラークに含まれるPlxyNPVは、Plxy1217細胞において増殖するが、増殖量はきわめて少ないことが考えられた。これらのプラークに含まれるPlxyNPVを、今後のさまざまな研究に供するため、培養細胞とコナガ幼虫の両方を用いて増殖させることを試みたが、満足のいく増殖を得ることはできながった。

The origin of P1xy1217 cells was studied in detail. Plxy1217 cells were cultured in IPL-41 medium for the first time, and the cell line was established in IPL-41 medium. Plxy1217 cell line was established to infect larvae and to prepare PlxyNPV inoculum for inoculation. The typical CPE and encapsulation for NPV infection were identified. PlxyNPV was purified from culture medium of infected cells, and Plxy1217 cells were used in the experiment. 12 isolates were used in the experiment. 14 days after inoculation, PlxyNPV was purified from culture medium. PlxyNPV culture solution containing PlxyNPV was inoculated with Plxy1217 cells, and the formation of the embedded body was shown. The infected cells were coarsely purified, and the composition of the embedded body was determined by the method of separation. The molecular weight is about 28 kDa. The growth of PlxyNPV and Plxy1217 cells was investigated. This is the first time I've ever been to a hospital.