血小板インテグリン活性化の分子機構の解析

血小板整合素激活的分子机制分析

• 批准号: 06J02733
• 负责人: 東 智仁
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J02733/
• 关键词: 血小板; アクチン; フォルミン; Daam1; mDial; in vitroアッセイ系; RhoA; インテグリン安定化; インテグリン; アクチン重合; formin; アフィニティ法

活性化血小板は、動的にアクチン細胞骨格を再構成し、血管への粘着や凝集の反応を引き起こす。このアクチン細胞骨格の再構成には、低分子量Gタンパク質RhoAが関与している事が示されて来た。本研究において、RhoAの血小板におけるエフェクター分子として、2種類のフォルミンタンパク質、mDia1およびDaam1が同定された。フォルミンタンパク質によって細胞質中で重合されたアクチンの量をビーズを用いて半定量的に解析するアッセイ系を新規に確立し、このアッセイ系を用いて両分子がともに細胞質中でアクチンを重合する活性を持つことが確認された。さらに、mDial及びDaam1のアクチン重合活性は、阻害的な分子内結合が活性型Rhoによって解き放たれることにより発揮されることが分かり、Rhoによって直接的に制御されている事が証明された。また、アゴニストによって活性化された血小板中で、Daam1とRhoAが複合体を形成し、その複合体がアクチンを重合する活性を持っていることも示された。これらのことより、活性化血小板中において、活性型になったRhoAがフォルミンと複合体を形成してアクチン細胞骨格を再構成する反応に関与している事が考えられる。さらに、Daam1の主たるアクチン重合ドメインであるFH2ドメインの立体構造を、X線構造解析により解明して報告した。本研究の成果は、血小板の形態変化を司る分子機構を明らかにしたもので、血栓止血学及び細胞生物学(特に細胞骨格制御の分子機構解明)に寄与したといえる。

The activated platelets <s:1>, the active にア, the チ, the <s:1> bone lattice を of the <s:1> cells reconstitute the <s:1>, the blood vessels へ, the <s:1> adhere to the や and agglutitate the <s:1>, which in turn 応を trigger the <s:1> す. こ の ア ク チ ン cells bone の reconstitution に は, low molecular weight G タ ン パ ク qualitative RhoA が masato and し て い が る things in さ れ て た. This study に お い て, RhoA の platelet に お け る エ フ ェ ク タ ー molecular と し て, 2 species の フ ォ ル ミ ン タ ン パ ク qualitative, mDia1 お よ び Daam1 が with fixed さ れ た. フ ォ ル ミ ン タ ン パ ク qualitative に よ っ て in cytoplasm で overlap さ れ た ア ク チ ン の quantity を ビ ー ズ を with い て half quantitative analytical す に る ア ッ セ イ を new し に established rules, こ の ア ッ セ を イ department with い て struck molecular が と も に cytoplasm で ア ク チ ン を overlap す る active を hold つ こ と が confirm さ れ た. さ ら に, mDial and び Daam1 の ア ク チ ン overlap は activity and resistance against な intramolecular combination type が active Rho に よ っ て solution き put た れ る こ と に よ り 発 swing さ れ る こ と が points か り, Rho に よ っ て direct に suppression さ れ て い が る things prove さ れ た. ま た, ア ゴ ニ ス ト に よ っ て activeness さ れ た platelet で, Daam1 と RhoA が complex を し, そ の complex が ア ク チ ン を overlap す る active を hold っ て い る こ と も shown さ れ た. こ れ ら の こ と よ り, activity of platelet in に お い て type, active に な っ た RhoA が フ ォ ル ミ ン と complex を form し て ア ク チ ン cells bone を reconstitution す る anti 応 に masato and し て い る matter が exam え ら れ る. さ ら に, Daam1 の main た る ア ク チ ン overlap ド メ イ ン で あ る FH2 ド メ イ ン の three-dimensional structure を, X-ray structure parsing に よ り interpret し て report し た. は の this study achievements, platelet の form - を department る molecular institutions を Ming ら か に し た も の で hemostasis and thrombosis and び cell biology (に cell bone suppression の molecular agencies interpret) に send し た と い え る.

项目成果

Crystal structure of human DAAM1 formin homology 2 domain

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2007.01132.x
• 发表时间: 2007-11
• 期刊: Genes to Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: M. Yamashita;T. Higashi;S. Suetsugu;Yusuke Sato;Tomoyuki Ikeda;R. Shirakawa;T. Kita;T. Takenawa;H. Horiuchi;S. Fukai;O. Nureki

Rhoによって制御される細胞質中のForminタンパク質によるアクチン重合

由 Rho 控制的细胞质中的 Formin 蛋白进行肌动蛋白聚合

• 发表时间: 2007
• 作者: 東 智仁;ほか
• 通讯作者: ほか

Constitutive GDP/GTP exchange and secretion-dependent GTP hydrolysis activity for Rab27 in platelets

• DOI: 10.1074/jbc.m603227200
• 发表时间: 2006-09-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Kondo, Hirokazu;Shirakawa, Ryutaro;Horiuchi, Hisanori
• 通讯作者: Horiuchi, Hisanori

Biochemical characterization of the Rho FTPase-regulated action assembly by diaphanous-related formins,mDial and Daaml,in platelets

血小板中透明相关福明、mDial 和 Daaml 调节 Rho FTPase 调节作用组装的生化特征

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Biological chemistry 283
• 作者: Higashi T;Ikeda T;Shirakawa R;Kondo H;Kawato M;Horiguchi M;Okuda T;Okawa K;Fukai S;Nureki O;Kita T;Horiuchi H
• 通讯作者: Horiuchi H