血小板インテグリン活性化の分子機構の解析

血小板整合素激活的分子机制分析

基本信息

批准号：
06J02733
负责人：
東智仁
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

活性化血小板は、動的にアクチン細胞骨格を再構成し、血管への粘着や凝集の反応を引き起こす。このアクチン細胞骨格の再構成には、低分子量Gタンパク質RhoAが関与している事が示されて来た。本研究において、RhoAの血小板におけるエフェクター分子として、2種類のフォルミンタンパク質、mDia1およびDaam1が同定された。フォルミンタンパク質によって細胞質中で重合されたアクチンの量をビーズを用いて半定量的に解析するアッセイ系を新規に確立し、このアッセイ系を用いて両分子がともに細胞質中でアクチンを重合する活性を持つことが確認された。さらに、mDial及びDaam1のアクチン重合活性は、阻害的な分子内結合が活性型Rhoによって解き放たれることにより発揮されることが分かり、Rhoによって直接的に制御されている事が証明された。また、アゴニストによって活性化された血小板中で、Daam1とRhoAが複合体を形成し、その複合体がアクチンを重合する活性を持っていることも示された。これらのことより、活性化血小板中において、活性型になったRhoAがフォルミンと複合体を形成してアクチン細胞骨格を再構成する反応に関与している事が考えられる。さらに、Daam1の主たるアクチン重合ドメインであるFH2ドメインの立体構造を、X線構造解析により解明して報告した。本研究の成果は、血小板の形態変化を司る分子機構を明らかにしたもので、血栓止血学及び細胞生物学(特に細胞骨格制御の分子機構解明)に寄与したといえる。

活化的血小板动态重建肌动蛋白细胞骨架，导致对血管粘附和聚集的反应。已经表明，低分子量G蛋白RhoA参与了肌动蛋白细胞骨架的这种重建。在这项研究中，将两种类型的formin蛋白MDIA1和DAAM1鉴定为RhoA血小板中的效应分子。建立了一种新的测定系统，在该系统中，通过珠子通过珠子分析了formin蛋白在细胞质中聚合的肌动蛋白量，并使用珠子分析了肌动蛋白，并使用该测定系统证实，这两个分子都具有在细胞质中聚合肌动蛋白的活性。此外，发现MDIAL和DAAM1的肌动蛋白聚合活性是通过主动形式RHO释放抑制性分子内键的，并且证明它们由Rho直接控制。还表明DAAM1和RHOA形成了由激动剂激活的血小板中的复合物，并且该复合物具有聚合肌动蛋白的活性。从这些原因中，人们认为活化的血小板中的活性RhoA形成了formin的复合物，并参与了重构肌动蛋白细胞骨架的反应。此外，通过X射线结构分析阐明了FH2结构域的三维结构，即DAAM1的主要肌动蛋白聚合结构域并报告。这项研究的结果揭示了负责血小板形态变化的分子机制，并且可以说是有助于血管血压和细胞生物学（尤其阐明了细胞骨架控制的分子机制）。

项目成果

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专利数量（0）

Crystal structure of human DAAM1 formin homology 2 domain

DOI：
10.1111/j.1365-2443.2007.01132.x
发表时间：
2007-11
期刊：
Genes to Cells
影响因子：
2.1
作者：
M. Yamashita;T. Higashi;S. Suetsugu;Yusuke Sato;Tomoyuki Ikeda;R. Shirakawa;T. Kita;T. Takenawa;H. Horiuchi;S. Fukai;O. Nureki
通讯作者：
M. Yamashita;T. Higashi;S. Suetsugu;Yusuke Sato;Tomoyuki Ikeda;R. Shirakawa;T. Kita;T. Takenawa;H. Horiuchi;S. Fukai;O. Nureki

Rhoによって制御される細胞質中のForminタンパク質によるアクチン重合

由 Rho 控制的细胞质中的 Formin 蛋白进行肌动蛋白聚合

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
東智仁;ほか
通讯作者：
ほか

Biochemical characterization of the Rho FTPase-regulated action assembly by diaphanous-related formins,mDial and Daaml,in platelets

血小板中透明相关福明、mDial 和 Daaml 调节 Rho FTPase 调节作用组装的生化特征

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Journal of Biological chemistry 283
影响因子：
0
作者：
Higashi T;Ikeda T;Shirakawa R;Kondo H;Kawato M;Horiguchi M;Okuda T;Okawa K;Fukai S;Nureki O;Kita T;Horiuchi H
通讯作者：
Horiuchi H