細胞間接着形成時のアクチン細胞骨格再構成を制御する分子機構の解析

细胞-细胞粘附形成过程中控制肌动蛋白细胞骨架重组的分子机制分析

基本信息

批准号：
11J00990
负责人：
東智仁
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞間接着部位の裏打ちアクチン細胞骨格の構築過程を明らかにするため、その制御因子の解析を引き続き行って来た。これまで、低分子量Gタンパク質RhoAの活性化因子であるPDZ-RhoGEFがマウスの上皮組織および培養上皮細胞において細胞間接着部位に局在する事、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞において、細胞間接着形成時に一過的に細胞間接着と垂直方向に伸びるアクチン繊維(ラディアルアクチン繊維)の形成が見られない事を明らかにしてきた。また、PDZ-RhoGEFを再発現したレスキュー細胞においては、ラディアルアクチン繊維形成がレスキューされること、RhoGEF活性をなくした変異体ではレスキューできない事を確認したPさらに、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞が三次元培養系において、中空のシスト構造を形成できない事を明らかにし、これらの結果を元に論文投稿準備中である。今年度は、秋より米国ミシガン大学のAnn Miller研に海外渡航し、アフリカツメガエル胚を用いて細胞間接着形成を観察する実験に取り組んで来た。Miller研では、活性型のRhoを特異的に感度よく検出できるプローブを用いることができ、また、繊維状アクチンをLifeActおよびUtrophinで、密着結合をZO-1で、接着結合をE-cadherinで可視化する事ができ、これらを用いて細胞間接着形成時のRhoの活性化状態を評価する事を目指している。また、細胞間接着形成機構の解析の過程で見いだした、1回膜貫通型タンパク質ILDR1とILDR2が三細胞間接着部位に局在し、別の三細胞間接着因子tricellulinの局在化と上皮バリア機能の確立に重要である、という結果を元に、現在ILDR1のノックアウトマウスの解析を進めている。

为了阐明细胞间粘附位点内衬肌动蛋白细胞骨架的施工过程，已经分析了调节因子。 Up until now, it has been revealed that PDZ-RhoGEF, an activator of the low molecular weight G protein RhoA, is localized at intercellular adhesion sites in mouse epithelial tissues and cultured epithelial cells, and that in PDZ-RhoGEF knockdown cells, actin fibers (radial actin fibers) that extend vertically with intercellular adhesion are not observed.此外，已经证实，径向肌动蛋白纤维的形成是在重新表达PDZ-RHOGEF的救援细胞中拯救的，并且无法挽救失去Rhogef活性的突变体。此外，已经揭示了PDZ-RHOGEF敲低细胞不能在三维培养系统中形成空心囊肿结构，并且基于这些结果，目前正在准备提交该论文。今年，我于秋季去了美国密歇根大学的安·米勒研究所（Ann Miller Institute），并开始进行实验，以观察使用Xenopus Embryos的细胞细胞粘附形成。 Miller Institute允许探针可以专门和敏感地检测活性RHO，并以LifeAct和Utrophin的形式可视化纤维肌动蛋白，与ZO-1的紧密键，以及用E-钙粘着蛋白的粘合键，这些键旨在评估细胞细胞粘附形成时Rho的激活状态。此外，基于在细胞细胞粘附形成机理的分析过程中发现的结果，单个跨膜蛋白ILDR1和ILDR2位于细胞间粘附位点，对于另一个间间间相互粘附因子三环蛋白和上皮式障碍的建立，我们的上皮型stonguttr anciDr osild osild osird of conderial barrial function，MILD的另一个间间相间粘附因子三环蛋白和建立非常重要。