細胞間接着形成時のアクチン細胞骨格再構成を制御する分子機構の解析

細胞間接着部位の裏打ちアクチン細胞骨格の構築過程を明らかにするため、その制御因子の解析を引き続き行って来た。これまで、低分子量Gタンパク質RhoAの活性化因子であるPDZ-RhoGEFがマウスの上皮組織および培養上皮細胞において細胞間接着部位に局在する事、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞において、細胞間接着形成時に一過的に細胞間接着と垂直方向に伸びるアクチン繊維(ラディアルアクチン繊維)の形成が見られない事を明らかにしてきた。また、PDZ-RhoGEFを再発現したレスキュー細胞においては、ラディアルアクチン繊維形成がレスキューされること、RhoGEF活性をなくした変異体ではレスキューできない事を確認したPさらに、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞が三次元培養系において、中空のシスト構造を形成できない事を明らかにし、これらの結果を元に論文投稿準備中である。今年度は、秋より米国ミシガン大学のAnn Miller研に海外渡航し、アフリカツメガエル胚を用いて細胞間接着形成を観察する実験に取り組んで来た。Miller研では、活性型のRhoを特異的に感度よく検出できるプローブを用いることができ、また、繊維状アクチンをLifeActおよびUtrophinで、密着結合をZO-1で、接着結合をE-cadherinで可視化する事ができ、これらを用いて細胞間接着形成時のRhoの活性化状態を評価する事を目指している。また、細胞間接着形成機構の解析の過程で見いだした、1回膜貫通型タンパク質ILDR1とILDR2が三細胞間接着部位に局在し、別の三細胞間接着因子tricellulinの局在化と上皮バリア機能の確立に重要である、という結果を元に、現在ILDR1のノックアウトマウスの解析を進めている。

細胞間接着部位の裏打ちアクチン細胞骨格の構築過程を明らかにするため、その制御因子の解析を引き続き行って来た。これまで、低分子量Gタンパク質RhoAの活性化因子であるPDZ-RhoGEFがマウスの上皮組織および培養上皮細胞において細胞間接着部位に局在する事、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞において、細胞間接着形成時に一過的に細胞間接着と垂直方向に伸びるアクチン繊維(ラディアルアクチン繊維)の形成が見られない事を明らかにしてきた。また、PDZ-RhoGEFを再発現したレスキュー細胞においては、ラディアルアクチン繊維形成がレスキューされること、RhoGEF活性をなくした変異体ではレスキューできない事を確認したPさらに、PDZ-RhoGEFノックダウン細胞が三次元培養系において、中空のシスト構造を形成できない事を明らかにし、これらの結果を元に論文投稿準備中である。今年度は、秋より米国ミシガン大学のAnn Miller研に海外渡航し、アフリカツメガエル胚を用いて細胞間接着形成を観察する実験に取り組んで来た。Miller研では、活性型のRhoを特異的に感度よく検出できるプローブを用いることができ、また、繊維状アクチンをLifeActおよびUtrophinで、密着結合をZO-1で、接着結合をE-cadherinで可視化する事ができ、これらを用いて細胞間接着形成時のRhoの活性化状態を評価する事を目指している。また、細胞間接着形成機構の解析の過程で見いだした、1回膜貫通型タンパク質ILDR1とILDR2が三細胞間接着部位に局在し、別の三細胞間接着因子tricellulinの局在化と上皮バリア機能の確立に重要である、という結果を元に、現在ILDR1のノックアウトマウスの解析を進めている。