超好熱性古細菌の糖代謝に関与する酵素の機能解析とX線結晶構造解析

超嗜热古菌糖代谢相关酶的功能分析和X射线晶体结构分析

• 批准号: 06J10865
• 负责人: 西増 弘志
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J10865/
• 关键词: 古細菌; ヘキソキナーゼ; X線結晶構造解析; induced-fit; リン酸転移

超好熱性古細菌Sulfolobus tokodaii由来のATP依存性新規ヘキソキナーゼ(StHK)の特徴的な基質認識機構の分子基盤を解明するために、StHKと数種類の基質分子との複合体のX線結晶構造を決定することを目指した。前年度までに、4つの異なる状態[(1)アポ状態、(2)グルコース複合体、(3)ADP複合体、(4)キシロース・Mg^<2+>・ADP複合体]の結晶構造を決定し、StHKはヌクレオチドの結合ではなく糖基質の結合により大きな構造変化を起こすことや、StHKは他のヘキソキナーゼの酵素と大きくことなる基質結合部位ループをもつごとなどを明ちかにした。本年度は、StHKの基質認識機構とリン酸転移反応機構をより詳細に理解するために、(1)N-アセチルグルコサミン・(GlcNAc)との二者複合体、および(2)グルコース、ADP、Mg^<2+>との四者複合体のX線結晶構造解析を目指した。GlcNAc複合体については、結晶化スクリーニングを行い、単結晶を得ることに成功したが、X線をほとんど回折しなかった。一方、グルコース、ADP、Mg^<2+>複合体については、複合体結晶を得て、2AまでのX線回折データを収集し、分子置換法により位相を決定し、現在精密化を行っている。これまでに得られた結果を、2007年9月に東京大学で開催された東京大学生命科学研究シンポジウム2007にてポスター発表し、さらにPFトピックスおよびPFニュースにて発表した。

The origin of the super-good bacteriological archaic bacteria Sulfolobus tokodaii, the molecular basis of the ATP-dependent new rules of disease diagnosis (StHK), the molecular basis of molecular biology, such as the number of genes, the complex of basic molecules, the X-ray crystal structure, the crystal structure, and the determination of the target index of DNA. In the previous year, the status of the previous year [(1) status, (2) complex, (3) ADP complex, (4) replication, mg ^ & lt;2+&gt ADP complex] the results show that the determination, the combination of StHK and glycosyl, the combination of glycosyl, glycosyl, and the combination of enzyme, enzyme This year, StHK basic knowledge institutions are concerned about how to make sure that they understand that: (1) the combination of the two, (1) the combination of the two, (2) the combination of the two, (2) the combination of ADP, mg ^ & lt;2+>, and the analysis of X-ray analysis. The GlcNAc complex was cloned, the results were crystallized, and the results were analyzed. The results showed that the success of the PCR was successful, and the X-ray was successfully folded. One side, ADP, mg ^ & lt;2+> complex, complex crystal, 2A ring, X-ray, molecular alignment, phase determination, and now the precision is fine. In September 2007, Beijing University began to promote the study of life sciences in Beijing University. In September 2007, Beijing University started to promote the development of life science research in Beijing University. In 2007, it did not show that it was successful. In addition, it did not show that PF did not have to pay attention to PF.

项目成果

Identification and characterization of an ATP-dependent hexokinase with broad substrate specificity from the hyperthermophilic archaeon Sulfolobus tokodaii

• DOI: 10.1128/jb.188.5.2014-2019.2006
• 发表时间: 2006-03-01
• 期刊: JOURNAL OF BACTERIOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Nishimasu, H;Fushinobu, S;Wakagi, T
• 通讯作者: Wakagi, T

Crystal structures of an ATP-dependent hexokinase with broad substrate specificity from the hyperthermophilic archaeon Sulfolobus tokodaii

• DOI: 10.1074/jbc.m610678200
• 发表时间: 2007-03-30
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Nishimasu, Hiroshi;Fushinobu, Shinya;Wakagi, Takayoshi
• 通讯作者: Wakagi, Takayoshi