メンブレントラフィックの調節における低分子量GTP結合蛋白質ARFとRabの共役

点击翻译按钮获取中文摘要

リサイクリングエンドソームを介する輸送に関与するRabllと、細胞膜付近でエンドサイトーシスやアクチン細胞骨格のリモデリングなどを調節するARF6の両方と相互作用する蛋白質FIP3とFIP4は、小胞輸送の調節において極めて重要な役割を果たすが、その生理的機能はほとんど不明である。本研究は、2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と共役するFIP3とFIP4の機能を分子レベルで解析し、細胞内輸送における役割を解明することを目的として行った。具体的には、以下のような実験を行った。1.FIP3およびFIP4に対するポリクローナル抗体の作製2.FIP3およびFIP4の安定発現細胞株の樹立3.FIP3およびFIP4の細胞内局在4.ARF,Rabllのドミナント・ネガティブ変異体によるFIP3,FIP4の細胞内局在の変化5.RNAi法によるRabllとARF6のノックダウン6.Yeast Two Hybrid法による結合蛋白質の検索7.細胞質分裂時のFIP3およびFIP4の局在変化本実験を通して、以下のことが明らかになった。1.2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と相互作用するFIP3とFIP4の局在は,Rabllによりリサイクリングエンドソームにリクルートされる。2.FIP3またはFIP4がリサイクリングエンドソームに局在することで,Rabllは膜で安定化する。3.細胞質分裂時には、FIP3とFIP4は2つの娘細胞の中心体付近から細胞間の橋状構造やFlemming bodyに局在する。4.細胞質分裂の際にもFIP3とFIP4はRabllとよく共局在した。これらの結果は、FIP3あるいはFIP4がRabllと相互作用することによってリサイクリングエンドソームに局在し、リサイクリングエンドソームの機能(局在)を調節する可能性を示唆する。現在、以上の内容をまとめて、論文を執筆中である。