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メンブレントラフィックの調節における低分子量GTP結合蛋白質ARFとRabの共役

Rab 与小 GTP 结合蛋白 ARF 偶联调节膜运输

基本信息

批准号：
06J40052
负责人：
高橋千絵
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J40052/
关键词：
メンブレントラフィック FIP3 FIP4 Rabll ARF6 細胞質分裂 Arfophilin

项目摘要

リサイクリングエンドソームを介する輸送に関与するRabllと、細胞膜付近でエンドサイトーシスやアクチン細胞骨格のリモデリングなどを調節するARF6の両方と相互作用する蛋白質FIP3とFIP4は、小胞輸送の調節において極めて重要な役割を果たすが、その生理的機能はほとんど不明である。本研究は、2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と共役するFIP3とFIP4の機能を分子レベルで解析し、細胞内輸送における役割を解明することを目的として行った。具体的には、以下のような実験を行った。1.FIP3およびFIP4に対するポリクローナル抗体の作製2.FIP3およびFIP4の安定発現細胞株の樹立3.FIP3およびFIP4の細胞内局在4.ARF,Rabllのドミナント・ネガティブ変異体によるFIP3,FIP4の細胞内局在の変化5.RNAi法によるRabllとARF6のノックダウン6.Yeast Two Hybrid法による結合蛋白質の検索7.細胞質分裂時のFIP3およびFIP4の局在変化本実験を通して、以下のことが明らかになった。1.2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と相互作用するFIP3とFIP4の局在は,Rabllによりリサイクリングエンドソームにリクルートされる。2.FIP3またはFIP4がリサイクリングエンドソームに局在することで,Rabllは膜で安定化する。3.細胞質分裂時には、FIP3とFIP4は2つの娘細胞の中心体付近から細胞間の橋状構造やFlemming bodyに局在する。4.細胞質分裂の際にもFIP3とFIP4はRabllとよく共局在した。これらの結果は、FIP3あるいはFIP4がRabllと相互作用することによってリサイクリングエンドソームに局在し、リサイクリングエンドソームの機能(局在)を調節する可能性を示唆する。現在、以上の内容をまとめて、論文を執筆中である。

ARF6 interacts with protein FIP3 and FIP4 to regulate cellular transport and its physiological function is unknown. The purpose of this study was to elucidate the molecular structure and intracellular transport of two types of low molecular weight GTase (Rabil and ARF6) and FIP3 and FIP4. The specific, the following. 1. Production of FIP3 and FIP4 Antibodies 2. Establishment of Stable Cell Lines for FIP3 and FIP4 3. The Intracellular Structure of FIP3 and FIP4 4 4 4. 5. Identification of binding proteins by RNAi method 7. Identification of FIP3 and FIP4 during cytokinesis 1.2 The low molecular weight GTase (Rabll ARF6) species interact with FIP3 and FIP4 in the presence of Rabll. 2. FIP3 and FIP4 are stable. 3. During cytoplasmic division, FIP3 and FIP4 are located near the centrosome of the mother cell, the bridge-like structure between the cells, and the Flemming body. 4. During cytoplasmic division, FIP3 and FIP4 coexist in Rabll. The result is that FIP3 and FIP4 interact with each other, and the possibility of adjusting the function of FIP3 and FIP4 is demonstrated. Now, the above content, paper.