メンブレントラフィックの調節における低分子量GTP結合蛋白質ARFとRabの共役

Rab 与小 GTP 结合蛋白 ARF 偶联调节膜运输

基本信息

批准号：
06J40052
负责人：
高橋千絵
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J40052/
关键词：
メンブレントラフィック FIP3 FIP4 Rabll ARF6 細胞質分裂 Arfophilin

项目摘要

リサイクリングエンドソームを介する輸送に関与するRabllと、細胞膜付近でエンドサイトーシスやアクチン細胞骨格のリモデリングなどを調節するARF6の両方と相互作用する蛋白質FIP3とFIP4は、小胞輸送の調節において極めて重要な役割を果たすが、その生理的機能はほとんど不明である。本研究は、2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と共役するFIP3とFIP4の機能を分子レベルで解析し、細胞内輸送における役割を解明することを目的として行った。具体的には、以下のような実験を行った。1.FIP3およびFIP4に対するポリクローナル抗体の作製2.FIP3およびFIP4の安定発現細胞株の樹立3.FIP3およびFIP4の細胞内局在4.ARF,Rabllのドミナント・ネガティブ変異体によるFIP3,FIP4の細胞内局在の変化5.RNAi法によるRabllとARF6のノックダウン6.Yeast Two Hybrid法による結合蛋白質の検索7.細胞質分裂時のFIP3およびFIP4の局在変化本実験を通して、以下のことが明らかになった。1.2種類の低分子量GTPase(RabllとARF6)と相互作用するFIP3とFIP4の局在は,Rabllによりリサイクリングエンドソームにリクルートされる。2.FIP3またはFIP4がリサイクリングエンドソームに局在することで,Rabllは膜で安定化する。3.細胞質分裂時には、FIP3とFIP4は2つの娘細胞の中心体付近から細胞間の橋状構造やFlemming bodyに局在する。4.細胞質分裂の際にもFIP3とFIP4はRabllとよく共局在した。これらの結果は、FIP3あるいはFIP4がRabllと相互作用することによってリサイクリングエンドソームに局在し、リサイクリングエンドソームの機能(局在)を調節する可能性を示唆する。現在、以上の内容をまとめて、論文を執筆中である。

蛋白质FIP3和FIP4与RABLL相互作用，它们与回收内体介导的转运有关，而ARF6则调节内吞作用和肌动蛋白细胞骨架在细胞膜附近，在调节囊泡运输方面起着至关重要的作用，但它们在调节囊泡中起着至关重要的作用。进行这项研究的目的是分析FIP3和FIP4的功能，这些功能与分子水平上的两种类型的低分子量GTPase（Rabll和ARF6）结合在一起，并阐明了细胞内转运中的作用。具体而言，进行了以下实验。 1。针对FIP3和FIP42的多克隆抗体制备。建立表达稳定FIP3和FIP43的细胞系。 FIP3和FIP4444的细胞内定位。 RNAi Method6通过ARF和RABLL 5的显性负突变体和Rabll 5的主要负突变体对FIP3和FIP4的亚细胞定位变化。通过酵母两个混合方法搜索结合蛋白7。细胞因子期间Fip3和Fip4定位的变化。通过此实验，揭示了以下内容。 1。与两个低分子量GTPase（Rabll和arf6）相互作用的FIP3和FIP4的定位，通过RABLL募集到回收内体。 2。通过将FIP3或FIP4定位到回收内体中，Rabll稳定在膜上。 3。在细胞因子时，Fip3和Fip4位于两个子细胞的中心体附近，到桥梁样结构以及细胞之间的flemming体。 4。FIP3和FIP4在细胞动力学期间也与RABLL一起良好共定位。这些结果表明，FIP3或FIP4可以通过与RABLL相互作用并调节回收内体的功能（定位）来定位以回收内体。目前，我正在撰写一篇论文，总结了上述内容。