权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

メンブレントラフィックの調節における低分子量GTP結合蛋白質ARFとRabの共役

Rab 与小 GTP 结合蛋白 ARF 偶联调节膜运输

基本信息

批准号：
07J40052
负责人：
高橋千絵
金额：
--
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J40052/
关键词：
メンブレントラフィック FIP3 FIP4 Rabll ARF6 細胞質分裂 Arfophilin

项目摘要

リサイクリングエンドソームを介する輸送に関与するRabllと、エンドサイトーシスやアクチン細胞骨格のリモデリングなどのように細胞膜付近で機能するARF6の両方と相互作用するタンパク質FIP3とFIP4は、小胞輸送を調節する上で極めて重要な役割を果たすが、その生理的機能はほとんど不明である。本研究は、2種類の低分子量GTPase(Rab11とARF6)と共役するFIP3とFIP4の機能を分子レベルで解析し、細胞内輸送における役割を解明することを目的としている。本年度は、以下の実験を行い、現在までに興味深い観察結果を得ている。今後はさらに詳細に解析を行い、分子レベルでの機能解明に至ることを期待している。1.ARF.Rabllのドミナント・ネガティブ変異体によるFIP3.FIP4の細胞内局在の変化 FIP3または4の発現によりRabllの局在が安定化されて共局在することがわかった。また、Rabllのドミナント・ネガティブ体の発現によりFIP3の局在が大きく変化することも認められた。2.FIP3およびFIP4特異的抗体の作製FIP3およびFIP4とGSTとの融合タンパク質を大腸菌で作製し、それらを抗原としてウサギに免疫し、血清を回収し、特異抗体を得た。ウェスタンブロッティングでは有用であったが、免疫染色には反応しなかったので、現在、抗原箇所を変えて再度作製を試みている。3.RNAi法によるFIP3とFIP4のノックダウンノックダウンの至適条件を確認することができた。4.Yeast Two Hybrid法による結合蛋白質の検索Yeast two hybrid法を用いたFIP3およびFIP4結合タンパク質としていくつかの有力な候補を得た。GST-Pulldownn法等を用いて結合の確認をしている。また、結合領域を絞るための欠損変異体を作製し始めている。5.細胞質分裂時におけるFIP3およびFIP4の局在EGFP-FIP3,EGFP-FIP4などを発現させたHeLa細胞を用いて、細胞質分裂時におけるFIP3,FIP4の挙動をタイムラプス・イメージングで観察している。FIP3,FIP4は分裂時には2つの細胞の中心体付近に一旦局在し、その後細胞間の橋上構造に局在することが観察された。今後は、分裂時のRabllやARF6の局在、FIP3,4の挙動との関連や、各種変異体やRNAiによる挙動変化の観察をする予定である。

リサイクリングエンドソームを开する Transportation Seki and するRabllと, エンドサイトーシスやアクチン Cellular skeleton のリモデリングなどのようにCell membrane close function するARF6's interaction and interaction properties, FIP3 and FIP4, and modulation of microcellular transport The festival is extremely important, the fruit is cut, and the physiological function is unknown. In this study, two types of low molecular weight GTPase (Rab11 and ARF6) co-operated with FIP3 and FI. The functions of P4 include molecular analysis and intracellular transport. This year, the following activities are carried out, and now I am very interested in observing the results. In the future, we are looking forward to the detailed analysis of the action and the explanation of the molecular function and the function of the molecules. 1. ARF.Rabll's intracellular localization of FIP3.FIP4 FIP3または4の発成によりRabllのbureau is inが stabilization and the co-bureau is in することがわかった.また, Rabllのドミナント・ネガティブ体の発appears によりFIP3のbureau in が大きく変化することも cognize められた. 2.FIP3およびFIP4-specific antibody production Production of Escherichia coli, Antigen immunity, Serum collection, and Specific antibodies. Useful ウェスタンブロッティングでは, immunostaining には reaction Now, I am trying to make a new version of the original version of the original version of the original product. 3. The RNAi method can be used to confirm the appropriate conditions for FIP3 and FIP4. 4. The Yeast Two Hybrid method uses the Yeast Two Hybrid method to combine the protein with the Yeast two hybrid method. The GST-Pulldown method, etc. are confirmed by combining them with each other.また, combined field を twist るための owed loss 変 variant を production し start めている. 5. During cytoplasmic division, the structure of FIP3 and FIP4 is in EGFP-FIP3, and the structure of EGFP-FIP4 is the same as that of FIP3. eLa cells use FIP3 and FIP4 during cytoplasmic division. When FIP3 and FIP4 divide, the centrosome of the cell is close to the center of the cell, and the structure on the bridge between the cells after the division is closed. In the future, the status of Rabll and ARF6 at the time of division, the relationship between FIP3 and 4, and the development of various mutant RNAi are scheduled to be determined.