权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Development of Photolabile Biotin Linkers by Using New Caged Compounds

使用新型笼状化合物开发光不稳定的生物素连接体

基本信息

批准号：
18390009
负责人：
AOKI Shin
金额：
$ 10.53万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

(+)-ビオチン(Btn)は、アビジン(Avn)と非常に安定な複合体を生成する。その解離定数Kdは約1fMであり、通常の抗原-抗体複合体の100万倍も強く、実質上不可逆である。本研究は、申請者らが発見したCaged化合物(8-quinolinyl sulfonates, QS)の光分解反応を利用することにより、光分解性Btn標識試薬の開発を目的とした。中性pH、常温という温和な条件下、光照射によってリガンド-レセプター複合体をintactな状態で回収し、特異的レセプターの同定、構造解析を行うための全く新しいBtn-Avnシステムを提供する。脳内神経伝達分子であるドーパミンを、光分解性QSリンカーを介してビオチンに結合した化合物(Biotin-Dopamine-HQ)の合成を行った。Biotin-Dopamine-HQと抗ドーパミン抗体(IgG)、および二次抗体(抗IgG抗体)を用いてELISAを行い、Avn、Biotin-Dopamine-HQ、IgG、抗IgG抗体の四者の複合体が生成することを確認した。さらにAvn、Biotin-Dopamine-HQ、IgGの三元複合体に光を照射し、リンカーが分解できることを確認し、分解後のDopamine-IgGの、Western blottingによる検出に成功した。以上の結果は、すでに論文発表された(Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 3405-3413)。また、上記の化合物もよりも長いリンカーを有するビオチン標識リンカーの合成にも成功した。同様にELISA、Western blottingを行ったところ、リンカーの延長は抗体との複合体形成、光分解にDopamine-抗体複合体の回収率に大きな変化はなかった。本結果についても、論文投稿の準備中である。さらに、本技術の基盤となるQS基質の光分解反応の反応機構についても詳細に検討し、論文投稿済みである。このように、本研究ではQS基質の新規光分解反応の発見、反応機構の解明を行い、それを光分解性Btn標識リンカーにまで応用した。現在、光分解性リポソームなどにも展開可能であり、今後が期待される。

(+)-(Btn)(Avn) The dissociation constant Kd is about 1fM, the antigen-antibody complex is usually 1 million times stronger, and it is essentially irreversible. The purpose of this study is to develop a photolytic reaction system for Caged compounds (8-quinolyl sulfonates, QS). Neutral pH, normal temperature, mild conditions, light irradiation, complex, intact state, recovery, unique, stable, structural analysis, and complete new Btn-Avn system Synthesis of Biotin Dopamine-HQ, a new compound, which can be used as an internal neurotransmitter and a photolytic neurotransmitter. Biotin-Dopamine-HQ and anti-IgG antibody (IgG), anti-IgG antibody and secondary antibody (anti-IgG antibody) were detected by ELISA. The complex of Avn, Biotin-Dopamine-HQ, IgG and anti-IgG antibody was generated. Avn, Biotin-Dopamine-HQ, IgG ternary complexes were successfully detected by light irradiation, Western blotting and decomposition. These results are reported in this paper (Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 3405-3413)。The above compounds were synthesized successfully. Same as ELISA, Western blotting, and the formation of dopamine-antibody complexes, photolysis, and the recovery of dopamine-antibody complexes. The results of this paper are in preparation for submission. In addition, this technology is based on the QS matrix photolysis reaction mechanism, detailed research, paper submission and preparation. In this study, we propose a new method for the detection of photolytic reactions on QS substrates, and the application of photolytic Btn labeling. Now, the decomposition of light is possible, the future is expected.