ダニ主要アレルゲンDerf2の脂溶性リガンド探索と複合体の構造・機能解析

寻找主要尘螨过敏原 Derf2 的脂溶性配体以及该复合物的结构和功能分析

• 批准号: 18770097
• 负责人: 市川 さおり
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Japan Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770097/
• 关键词: アレルゲン; リガンド; 構造解析

著者はその立体構造とMLタンパク質の構造類似性から、ダニ主要アレルゲンDer f2が脂質様リガンドと結合する可能性を示唆してきた。本研究は、Der f2の脂質様リガンドを探索し、その複合体の構造解析を行なうことを目的としている。平成19年度は、1「Der f2の大量発現および精製」、2「Der f2のリガンド探索とNMRによる複合体の構造解析」、3「Der f2とリガンド複合体の結晶化とX線結晶解析」を行なった。1では、大腸菌による大量発現系を用いて、リガンド探索および構造解析に必要十分なタンパク量を得た。2では、Der f2が大腸菌表面と結合することから、Der f2と大腸菌JM109株破砕物との結合実験、ならびにDer f2とリポ多糖の結合実験を行なった。複合体の確認はゲルろ過クロマトグラフィーとNMRを用いた。Der f2と大腸菌破砕物との複合体の構造解析から、リガンドは糖脂質であり、腸内グラム陰性菌に共通の三糖の繰り返し(→4GlcNAcβ1→3Fuc4NAcαl→4ManNAcAβ1→)をもつことが示唆された。また、Der f2とリポ多糖との結合も確認された。Der f2のトリプトファン蛍光がリポ多糖との結合により消光することを利用して、結合定数を求めた結果、KdはμMのオーダーであることがわかった。3では、Der f2とlipid Aとの結晶化スクリーニングを行ない、得られた結晶を回折測定した。現在解析が進行中であるが、Der f2分子内に脂質の電子密度が見えている。本研究に必要な試薬類や器具類には消耗品費を用いた。

Authorはそのthree-dimensional structureとMLタンパク性のstructural similarityから、ダニmainアレルゲンDer f2がlipid様リガンドとcombination possibilityをshows instigationしてきた. The purpose of this study is to explore the structure of Der f2 lipids and to analyze the structure of the complex. Heisei 19は, 1 "Der f2's large-scale production and refinement", 2 "Der f2's exploration of NMR's structural analysis of the NMR complex", 3 "Der f2とリガンド complex crystallization and X-ray crystal analysisを行なった. 1. It is necessary to analyze the structure of large amounts of Escherichia coli and Escherichia coli to explore and analyze the structure of Escherichia coli. 2では、Der f2がcoliform surface and binding することから、Der f2とcoliform JM109 strain broken material and binding 実験、ならびにDer f2とリポpolysaccharideのcombination実験を行なった. Confirmation of the complex was carried out by using NMR technology using a laboratory laboratory. Der Structural analysis of f2 and coliform degrading complex complex, リガンドはglycolipid であり, and intestinal グラムnegative bacteria にtrisaccharide の缲り回し(→4GlcNAcβ1→3Fuc4NAcαl→4ManNAcAβ1→)をもつことが时憆された.また, Der f2 とリポpolysaccharide との conjugation もconfirmation された. Der f2のトリプトファン蛍光がリポpolysaccharideとのcombinationにより Mattingすることをutilizationして, combine the definite number を to find the result, KdはμMのオーダーであることがわかった. 3では, Der f2とlipid Aとのcrystallizationスクリーニングを行ない, get られたcrystallizationをreflection measurementした. The analysis is currently in progress, and the electron density of the lipid within the Der f2 molecule is also analyzed. This study is necessary to test the cost and use of consumables in various categories and appliances.