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ツメガエル卵母細胞及び初期胚を用いたサイクリンBサブタイプの機能差の解明

使用非洲爪蟾卵母细胞和早期胚胎阐明细胞周期蛋白 B 亚型的功能差异

基本信息

批准号：
18770174
负责人：
吉留賢
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770174/
关键词：
紡錘体形成サイクリンB M期促進因子細胞内局在

项目摘要

サイクリンBはCdc2キナーゼと複合体を形成し、卵成熟/M期促進因子(MPF)として真核細胞のM期の進行に中心的な役割を果すが、脊椎動物においては、高度に保存された複数のサブタイプに分化している。ノックアウトマウスの実験から、サイクリンB1がMPFとして機能するB型サイクリンの原型であり、細胞内局在の異なるもののB1で代用可能なB2は重要でないとされている。しかし、脊椎動物以外のB型サイクリンの局在シグナルのアミノ酸配列は、サイクリンB1よりもむしろB2の方に相同性を示すことや、B2局在シグナルの過剰発現によりッメガエル卵母細胞の第一減数分裂の紡錘体形成が阻害されることなどから、B2の特異的機能が示唆される。そこで、申請者はサイクリンB2の機能を解明するべく、本研究を行った。サイクリンB2の局在シグナルが細胞内で局在性を示すか調べた所、局在シグナルの有無で細胞内局在が変わることが示された。しかし、局在シグナルの過剰発現は内在性サイクリンB2の細胞内局在を乱す傾向を示すものの、抗体の擬陽性反応のため、明確な結論に至っていない。そこで、確証を得るべく染色法の確立と抗体の精製を続け、早期に成果発表を行う予定である。更に、アンチセンスモルフォリノオリゴをツメガエル受精卵に注入し、初期卵割におけるサイクリンB2の発現を特異的に阻害した所、B1の発現周期が早くなると共に、卵割の進行が早くなり、紡錘体形成は正常なものの、不等分裂や非同調卵割が観察された。このことは、卵割期におけるMPF活性化の律速段階がB型サイクリンの集積量ではなく、サイクリンB2自体であることを示すと共に、B2の未知の分裂抑制的な制御機構が卵割期の同調的で規則正しい細胞周期を保証している可能性を示唆している。以上のことから、サイクリンB2にはB1とは異なる重要な機能があることが示唆され、更なる検証の必要性が示された。

サイクリンBはCdc2キナーゼと complex formationし, egg maturation/M phase promoting factor (MPF) and eukaryotic cell M phase The center of the center is the cutting of the fruits, the vertebrates of the vertebrates, the height of the preservation of the されたplural of the のサブタイプにdifferentiation of the している.ノックアウトマウスの実験から、サイクリンB1がMPFとしてfunctionalityするB typeサイクリンのThe prototype is different, and the internal structure of the cell is different. It is possible to replace B1 with B2, which is important.しかし, type B サイクリンのburo other than vertebrates is arranged in シグナルのアミノ acid B2 The first meiotic division of the oocyte is the first meiotic division of the oocyte. The hammer body forms the special function of blocking and instigating the B2.そこで、Applicant はサイクリンB2の Function を明するべく、This research を行った. The localization of サイクリンB2 is in the シグナルが cells and the locality is shown and the tone is All the cells are inside the cells.しかし、内在シグナルのpass剰発appearはinternality サイクリンB2のcell internal internal chaos The trend is clear, the antibody is pseudo-positive, and the conclusion is clear.そこで、Confirmation をGet るべくThe staining method is established and the antibody is refined を続け、Early stage results are listed and performed うPredetermined である. More details Into the early stage of egg cutting and the special blocking effect of B2 Therefore, the cycle of B1 is early and early, the progress of egg cutting is early and early, the spindle formation is normal, and the unequal division is non-synchronic egg cutting and inspection.このことは, egg cutting period におけるMPF activation のtempo stage がB type サThe accumulated amount of イクリンのではなく, サイクリンB2 self-made であることをshow The control mechanism of the unknown division inhibition of B2 and the synchronization of the egg cutting period are the regular rules of the cell cycle and the guarantee of the possibility of the cell cycle. Above のことから、サイクリンB2にはB1とはdifferentなるimportantなThe function is clear and the necessity of changing the proof is clear.