サイクリンBに特異的なコビキチン化酵素の単離

细胞周期蛋白 B 特异性共聚蛋白化酶的分离

• 批准号: 07680775
• 负责人: 田中 弘文
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680775/
• 关键词: サイクリンB; ユビキチン; 細胞周期

M期開始に関わるMPFはサイクリンB/cdc2複合体で、cdc2の特定部位のリン酸化・脱リン酸化を介して活性化され、細胞はM期に進行する。M期の終了にはサイクリンBの分解に依存したMPFの不活性化が必要であり、サイクリンBはM期中期から後期の移行期に急激に分解される。このサイクリンBの分解はユビキチン化に依存したプロテアソーム系を介して行われると考えられているがその詳細は未だ明らかでない。そこで本研究では、哺乳動物細胞を用いたサイクリンBのユビキチン化の系を開発するとともに、サイクリンBの分解に関与する因子を同定する事を目的にサイクリンBと結合する蛋白質の単離を試みた。1.サイクリンBユビキチン化のin vitro系の開発:バキュロウイルス系で発現させたGST-サイクリンB融合蛋白質、ビオチン化ユビキチンを基質として、HeLa細胞の抽出液を酵素源としたin vitroの系を確立した。この系にユビキチン活性化酵素(E1)、ならびにユビキチン輸送蛋白(UBC4,UBCH5)を添加することでサイクリンBのユビキチン化が著しく促進された。またサイクリンBのユビキチン化は細胞周期依存性で分裂期の抽出液が最も高い活性を示した。2.サイクリンBを認識する蛋白質の単離:yeast two-hybrid systemを用いてサイクリンBを認識する蛋白質をスクリーニングした結果、細胞内小胞輸送に関与するコート蛋白質の一つである,β′-COPのヒト及びウシcDNAと高い相同性を持つマウスcDNAが単離された。このマウスβ′-COPとサイクリンBとの結合を検討したところ、β′-COPのC末側とサイクリンBのN末側が結合することが明らかとなった。今後、精製蛋白を用いたサイクリンBユビキチン化の再構成系を開発するとともに、β′-COPのサイクリンBユビキチン化への関与を明らかにする必要がある。

Phase M begins to induce MPF replication, B/cdc2 replication, deacidification, acidification, activation, and cell cycle transformation in specific parts of cdc2. During the M period, there was a breakdown of dependency, MPF, inactivation, necessary, B, M, metaphase, post-transition, acute breakdown, etc. I don't know what to do. I don't know what's going on. I don't know. In this study, mammalian animals were used in this study and mammalian animals were used in this study. in this study, mammalian animals were used in this study and mammalian animals were used in this study. in this study, mammalian cells and mammalian animals were used in this study and mammalian animals were used in this study. 1. This is the first step in the development of the in vitro system. In this way, the GST- fusion protein was detected, the fusion protein was purified, and the enzyme source was isolated from the in vitro system. The enzyme is activated (E1), the enzyme is activated (E1), the protein (UBC4,UBCH5) is added, and the enzyme is activated. The extract of cell cycle-dependent mitotic phase showed the highest activity. two。