新規の葉緑体タンパク質分解系:RCB経路の分子機構

新型叶绿体蛋白降解系统：RCB途径的分子机制

• 批准号: 18780042
• 负责人: 石田 宏幸
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780042/
• 关键词: Rubisco; 老化; 植物; オートファジー; 葉緑体; 分解; シロイヌナズナ

本研究では、窒素転流機構と光合成機能維持の両面から植物の生長に深く関わる老化葉における葉緑体タンパク質の分解機構について分子レベルで明らかにすることを目的とし、本年度は以下の2項目について実験を行った。(1)RCB経路に関わるプロテオーム解析先に確立した葉緑体移行GFP発現シロイヌナズナと共焦点レーザー顕微鏡を用いたRCBの生葉における可視化法を用いて、RCBが蓄積した液胞を単離し、これとRCBが蓄積していない液胞を2次元電気泳動に供し、両者で差異の見られるポリペプチドのスポット群を特定することを試みた。まずRCBを含む液胞を単離する方法について検討した。RCBを形成させた葉からセルラーゼとペクチナーゼを用いた酵素法によりプロトプラストを単離した。その後、プロトプラストを破砕し液胞を遊離させた後、パーコールによる密度勾配超遠心法により液胞を単離した。単離した液胞にはRCBの存在が確認された。しかし、液胞画分には少量ながら葉緑体の混入が認められた。よってRCBのプロテオーム解析を行うためにはさらなる精製方法の確立が必要であることがわかった。(2)ストロミュール形成変異体の選抜葉緑体移行GFP発現シロイヌナズナの種子にEMS処理を行い、突然変異体のプールを作成した。この中からストロミュールの形成に異常の見られる変異体を共焦点レーザー顕微鏡により選抜する方法を確立した。17000個体のM2植物から、複数の変異個体を得た。さらに得られた変異個体について戻し交配、異なるエコタイプとの交配を進め、原因遺伝子同定のための材料を整備した。

In this study, the photosynthetic mechanism of asphyxiant and asphyxiant flow mechanism can maintain the growth and growth of plants. The decomposition mechanism of aging plant is very important. In this study, the molecular mechanism is used to understand the purpose of the plant growth, and the following two projects are in good condition this year. (1) make sure that the vehicle is transferred to the GFP in the first place, and that the common focus of the device is detected. (1) the application of the RCB method, the RCB storage system, the cell isolation device, the RCB storage unit, the secondary cell swimming machine, the storage unit, the receiver, the receiver, the This is not the case. Please do not know if you are in a group-specific environment. The "RCB" contains the liquid cell to isolate the liquid cell from the liquid cell. RCB said that the enzyme method was used to isolate the virus. After the treatment, the liquid cell was isolated and the density was matched with the supercenter method. There is a confirmation device in the isolated liquid cell RCB. The liquid cell and the liquid cell are divided into two parts: a small amount of the body is mixed with the recognition. Please make sure that the necessary information is required when you make sure that the necessary information is required. (2) if you want to move your body to GFP, you will see that you are going to have a problem, and then you will have to do something about it. (2) if you choose to move your body to GFP, you will see that you are going to have a problem with your computer. Please select the method to make sure that the common focus of the body is in common focus. 17000 M2 plants and complex plants were found to be successful. It is necessary to make sure that the mating is in progress, and the reason is the same as that of the material.

项目成果

窒素転流とRCB輸送を介しての液胞中のRubisco分解

Rubisco 通过氮易位和 RCB 运输在液泡中降解

• 发表时间: 2008
• 作者: Ishida;H.;et. al.;石田 宏幸
• 通讯作者: 石田 宏幸

Visualization of Rubisco-containing bodies derived from chloroplasts in living cells of Arabidopsis

拟南芥活细胞中叶绿体衍生的含 Rubisco 体的可视化

• 发表时间: 2008
• 期刊: Proceedings Photosynthesis Research 2007 (印刷中)
• 作者: Ishida;H.;et. al.
• 通讯作者: et. al.