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酵母における蛋白質合成阻害ストレスに対するmRNA安定化制御機構の研究

酵母响应蛋白质合成抑制应激的mRNA稳定控制机制研究

基本信息

批准号：
18780065
负责人：
高久洋暁
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

酵母Candida maltosaは蛋白質合成阻害剤であるシクロヘキシミド(CYH)に対し、生育の一時停止後に再び生育が回復する誘導的耐性を示す。これは、CYH添加後、転写活性化因子C-Gcn4pが、CYH耐性L41リボソーム蛋白質遺伝子(L41-Q)の転写を誘導し、CYH耐性型リボソームが合成されることに起因する。CYH添加後及びヒスチジン飢餓を誘導する3-AT添加後の転写活性化因子C-Gcn4pの制御をmRNA、蛋白質レベルにおいて解析するため、GFP又はHAタグと融合したC-Gcn4pの検出を試みたが、十分に解析できるレベルのものは構築できなかった。そこでFLAGタグ融合型C-Gcn4pを用いたところ、機能も相補、検出感度も解析に十分であった。FLAGタグ融合型C-GCN4をC-GCN4破壊株に導入し、3-AT或いはCYH添加後のC-GCN4mRNA、蛋白質レベルの解析を行った。3-AT添加後、C-GCN4mRNA量の上昇率以上にC-Gcn4p量の上昇率が大きかったので、転写、翻訳段階における制御、特に翻訳制御が大きく寄与していることが示唆された。CYH添加1時間後、C-GCN4 mRNA量は一時的に大きく上昇するが、逆にC-Gcn4p量は減少した。その後、C-GCN4mRNA量は減少するが、逆にC-Gcn4p量は増加し、CYH添加前の約1.5倍まで上昇し、一定となった。すなわち、CYHによるmRNAの安定化で一時的にRNA量は上昇するが、CYH添加直後の蛋白質合成は厳しく抑制されるためにC-Gcn4p量は減少したと考えられた。その後、C-Gcn4pの上昇ともにL41-Q転写誘導が促進されたが、C-Gcn4p量が一定量になったにもかかわらず、転写誘導効率がその後数時間上昇し続けたことから、C-Cpc2pなどのC-Gcn4p活性調節因子の関与の可能性が考えられた。

The synthesis of yeast Candida maltosa protein hinders the growth of yeast and inhibits the tolerance of CYH. When the baby stops giving birth, it will give birth to the tolerance of the mouse. After adding CYH, we wrote the activation factor C-Gcn4p, the CYH tolerance L41 receptor protein gene (L41MurQ), and the CYH tolerance gene synthesization.These genes were synthesized. After the addition of CYH and the addition of 3-AT, the activation factor C-Gcn4p was written to control mRNA, protein fusion, C-Gcn4p fusion, and so on. For FLAG systems, integrated C-Gcn4p systems are very sensitive to performance, performance, and sensitivity analysis. FLAG, fusion C-GCN4, C-GCN4 broken strain, 3-AT or CYH were added, C-GCN4mRNA and protein were analyzed. After the addition of 3-AT, the rate of C-GCN4mRNA is higher than that of C-Gcn4p, and the rate of writing, writing, flipping, reversing, controlling, reversing, reversing, reversing, After the CYH is added 1, the C-GCN4 mRNA quantity is up and down, and the reverse C-Gcn4p quantity is low. After treatment, the amount of C-GCN4mRNA was reduced, the amount of C-Gcn4p was increased, and about 1.5 times of that before CYH was added. After the mRNA was stabilized by CYH and CYH, the protein synthesis was suppressed by the addition of CYH, and the C-Gcn4p was reduced. After the start of the day, C-Gcn4p registered L41MercQ to guide the promotion of C-Gcn4p activity, C-Gcn4p measured a certain amount of monitoring, and C-Cpc2p tested the activity of C-Gcn4p activity factors and probabilities after a few minutes of reading.