生理的重炭酸緩衝液における低密度リポタンパク質のリポキシゲナーゼによる酸化機序

生理碳酸氢盐缓冲液中脂氧合酶氧化低密度脂蛋白的机制

• 批准号: 18780098
• 负责人: 新井 博文
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780098/
• 关键词: リポキシゲナーゼ; 低密度リポタンパク質; 重炭酸イオン

(1)HCO_3^-/CO_2緩衝液における15-リポキシゲナーゼ(LOX)の低密度リポタンパク質(LDL)への反応性非ヘム鉄を分子内に有するLOXの活性は、HCO_3^-/CO_2により影響を受ける可能性がある。そこで、HCO_3^-/CO_2緩衝液およびリン酸緩衝液において精製LDLにウサギ網状赤血球15-LOXを反応させ、脂質過酸化反応およびアポリポタンパク質酸化をSDS-PAGEおよびイムノブロットで分析した。その結果、コレステロールエステルヒドロペルオキシドの生成速度およびタンパク質カルボニルの生成量において、HCO_3^-/CO_2緩衝液とリン酸緩衝液との間に有意な差は認められなかった。また、α-トコフェロールを共存させた場合の15-LOX阻害活性を両緩衝液において比較したが、これについても有意な差は認められなかった。15-LOX反応に対してHCO_3^-/CO_2緩衝液は影響を及ぼさないことが示された。(2)HCO_3^-/CO_2緩衝液におけるヘム鉄によるLDLの酸化鉄イオンとHCO_3^-の配位結合は比較的弱いと考えられており、HCO_3^-とキレート剤の共存が、LOXによるLDL酸化反応に及ぼす可能性がある。そこで、ヘム鉄の一種であるヘミンを用いてLDLの酸化を行い、HCO_3^-/CO_2緩衝液の影響を調べた。その結果、リン酸緩衝液に比べ、HCO_3-/CO_2緩衝液ではヘミンによるコレステロールエステルヒドロペルオキシドの生成速度およびタンパク質カルボニルの生成量が増加した。ヘム鉄は、LDLの酸化において、これまで考えられているよりもより危険な因子となりうることが示唆された。

（1）在HCO_3^ - /CO_2缓冲液中，具有分子内非血红素铁反应性的LOX对低密度脂蛋白（LDL）的活性可能受HCO_3^ - /co_2的影响。因此，通过SDS-PAGE和IMMUNOBOLOT分析了HCO_3^ - /co_2缓冲液和磷酸盐缓冲液中的兔网状细胞15-LOX与HCO_3^ - /CO_2缓冲液和磷酸盐缓冲液反应，并通过SDS-PAGE和免疫印记分析了脂质过氧化和载脂蛋白氧化。结果，HCO_3^ - /CO_2缓冲液与磷酸盐缓冲液之间在胆固醇酯氢过氧化物的速率和蛋白羰基量之间未观察到显着差异。此外，在两个缓冲液中比较了α-生育酚时15-LOX抑制活性，但在这种情况下也没有观察到显着差异。结果表明，HCO_3^ - /CO_2缓冲液对15-LOX反应没有影响。 （2）HCO_3^ - /co_2缓冲液在HCO_3^ - 通过HCO_3^ - 在HCO_3^ - /co_2中的氧化铁离子之间的配位键被认为相对较弱，并且HCO_3^^ - 且螯合剂的共存可能会影响lox的LDL氧化反应。因此，使用Hemin（一种类型的血红素铁）氧化LDL，以研究HCO_3^ - /CO_2缓冲液的效果。结果，在HCO_3-/CO_2缓冲液中，Hemin产生的胆固醇酯氢过氧化物的速率和蛋白羰基的量增加。已经提出，血红素铁在LDL氧化中可能是比以前想象的更危险的因素。