生理的重炭酸緩衝液における低密度リポタンパク質のリポキシゲナーゼによる酸化機序

生理碳酸氢盐缓冲液中脂氧合酶氧化低密度脂蛋白的机制

• 批准号: 18780098
• 负责人: 新井 博文
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780098/
• 关键词: リポキシゲナーゼ; 低密度リポタンパク質; 重炭酸イオン

(1)HCO_3^-/CO_2緩衝液における15-リポキシゲナーゼ(LOX)の低密度リポタンパク質(LDL)への反応性非ヘム鉄を分子内に有するLOXの活性は、HCO_3^-/CO_2により影響を受ける可能性がある。そこで、HCO_3^-/CO_2緩衝液およびリン酸緩衝液において精製LDLにウサギ網状赤血球15-LOXを反応させ、脂質過酸化反応およびアポリポタンパク質酸化をSDS-PAGEおよびイムノブロットで分析した。その結果、コレステロールエステルヒドロペルオキシドの生成速度およびタンパク質カルボニルの生成量において、HCO_3^-/CO_2緩衝液とリン酸緩衝液との間に有意な差は認められなかった。また、α-トコフェロールを共存させた場合の15-LOX阻害活性を両緩衝液において比較したが、これについても有意な差は認められなかった。15-LOX反応に対してHCO_3^-/CO_2緩衝液は影響を及ぼさないことが示された。(2)HCO_3^-/CO_2緩衝液におけるヘム鉄によるLDLの酸化鉄イオンとHCO_3^-の配位結合は比較的弱いと考えられており、HCO_3^-とキレート剤の共存が、LOXによるLDL酸化反応に及ぼす可能性がある。そこで、ヘム鉄の一種であるヘミンを用いてLDLの酸化を行い、HCO_3^-/CO_2緩衝液の影響を調べた。その結果、リン酸緩衝液に比べ、HCO_3-/CO_2緩衝液ではヘミンによるコレステロールエステルヒドロペルオキシドの生成速度およびタンパク質カルボニルの生成量が増加した。ヘム鉄は、LDLの酸化において、これまで考えられているよりもより危険な因子となりうることが示唆された。

(1) HCO_3 ^ - / CO_2 buffer に お け る 15 - リ ポ キ シ ゲ ナ ー ゼ (LOX) の low density リ ポ タ ン パ ク mass (LDL) へ の opposite of ヘ 応 sex objects ム iron を intramolecular に have す る LOX activity の は, HCO_3 ^ - / CO_2 に よ り を by け る possibility が あ る. そ こ で, HCO_3 ^ - / CO_2 buffer お よ び リ ン acid buffer に お い て refined LDL に ウ サ ギ mesh red blood cell 15 - LOX を anti 応 さ せ acidification passes, lipids against 応 お よ び ア ポ リ ポ タ ン パ ク qualitative acidification を sds-page お よ び イ ム ノ ブ ロ ッ ト で analysis し た. そ の results, コ レ ス テ ロ ー ル エ ス テ ル ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ド の generating speed お よ び タ ン パ ク qualitative カ ル ボ ニ ル の generation に お い て, HCO_3 ^ - / CO_2 buffer と リ ン acid buffer と の に intentionally な difference between は recognize め ら れ な か っ た. ま た, alpha ト コ フ ェ ロ ー ル を coexistence さ せ た occasions の 15 - LOX resistance against active を struck buffer に お い て compare し た が, こ れ に つ い て も intentionally な poor は recognize め ら れ な か っ た. The effect of the reaction of 15-LOX 応に on the てHCO_3^-/CO_2 buffer is を and the ぼさな された された とが とが とが shows された. (2) the HCO_3 ^ - / CO_2 buffer に お け る ヘ ム iron objects に よ る LDL の acidification iron objects イ オ ン と HCO_3 ^ - の coordinate bond は comparative weak い と exam え ら れ て お り, HCO_3 ^ - と キ レ ー ト tonic の coexistence が, LOX に よ る LDL acidification anti 応 に and ぼ す possibility が あ る. そ こ で, ヘ ム iron objects の a で あ る ヘ ミ ン を with い て LDL の acidification を い, HCO_3 ^ - / CO_2 buffer の influence を adjustable べ た. そ の results, リ ン acid buffer に than べ, HCO_3 - / CO_2 buffer で は ヘ ミ ン に よ る コ レ ス テ ロ ー ル エ ス テ ル ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ド の generating speed お よ び タ ン パ ク qualitative カ ル ボ ニ ル の generation が raised plus し た. ヘ ム iron objects は, LDL の acidification に お い て, こ れ ま で exam え ら れ て い る よ り も よ り dangerous 険 な factor と な り う る こ と が in stopping さ れ た.