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遺伝子多型に基づく簡便な人参類生薬の同定法の開発

基于遗传多态性的人参药材简易鉴定方法的建立

基本信息

批准号：
18790008
负责人：
朱シュウ
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790008/
关键词：
人参類遺伝子多型同定 DNAマイクロアレイ 18S rRNA遺伝子 trnK遺伝子標準化 SNPs解析

项目摘要

1.18S rRNA遺伝子の塩基配列に基づいたDNAマイクロアレイを作製し、その有用性を証明した。(1)前年度に作製した試作品における基礎検討の結果を踏まえ、汎用の人参類生薬同定用DNAマイクロアレイ(PNX-array)を作製した。PNX-arrayでは、18S rRNA遺伝子に認められる11箇所の塩基置換または欠失に対応するll区画を設け、その区画内で塩基の置換または有無を検出できるように各2〜5プローブ(3スポットずつ)を配置した。解析結果をバーコードとして表示し、簡単に識別できるように設計した。(2)Panzx属植物から得られた18S rRNA遺伝子部分領域の、蛍光標識したPCR産物(ターゲット)をPNX-arrayにハイブリダイズさせ、マイクロアレイスキャンナーから得られる蛍光パターンが設計どおりであるかを確認した。(3)汎用の人参類生薬、薬用人参、西洋人参、三七人参、竹節人参などを用いで検証を行った。例えば、薬用人参をターゲットとした場合、11区画において、全て左から1番目のプローブに特異的な結合が確認され、P. ginsengに特異的なパターン「11111111111」と一致した。(4)市販の健康食品の薬用人参、西洋人参及び三七人参を含有する錠剤、カプセル剤、粉末剤について同様に検討した結果、基原種と一致する特異的な蛍光パターンが表示され、同定できた。2.trnK遺伝子及び18S rRNA遺伝子両領域におけるDNAマイクロアレイを作製した。全分類群を向定するため、両遺伝子の塩基配列に基づいた63種類のプローブを設計し、420スポット(3つのサブアレイを含む2組/スライド)の人参類同定用DNAマイクロアレイを作製した。蛍光ラベル化したtrnK遺伝子の部分領域2断片及び18S rRNA遺伝子の部分領域のPCR産物をターゲットとして検討を行った。

1.18S rRNA gene base alignment in the middle of the DNA sequence, and prove the usefulness of (1)The results of the basic research conducted in the previous year were as follows: (1) the preparation of DNA for the determination of ginseng production in general use (PNX-array); PNX-array is composed of 11 pairs of 18S rRNA sequences, 2 to 5 pairs of 18S rRNA sequences, 3 pairs of 18S rRNA sequences, and 3 pairs of 18S rRNA sequences. The analysis results show that the design of the product is simple and easy to identify. (2)Panzx plants were identified by PCR products from 18S rRNA gene fragments in PNX-array. (3)Pan-ginseng raw materials, ginseng, ginseng For example, if you use ginseng, you can use it in the 11 th area. If you use ginseng, you can use it in the 11 th area. If you use ginseng, you can use ginseng. If you use ginseng, you can use ginseng. (4)Ginseng, western ginseng and panax notoginseng, which are commercially available for health food, contain the same amount of tablets, powders and powders. The results of the investigation are consistent with those of the original species. 2. TrnK gene and 18S rRNA gene are the key genes in DNA sequencing. The DNA sequence of 63 species of ginseng was designed and manufactured according to the gene sequence of all taxa. The PCR products of some regions of the 18S rRNA gene and some regions of the 18S rRNA gene were analyzed.