HCV複製増殖に関わる分子シャペロン・サイクロフィリンの機能解析

参与 HCV 复制和增殖的分子伴侣亲环蛋白的功能分析

• 批准号: 18790446
• 负责人: 中川 美奈
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790446/
• 关键词: サイクロスポリンA(CsA); C型肝炎ウイルス(HCV); サイクロフィリン; Two Hybrid法; 蛋白相互作用; HCVレプリコン・システム; サイクロスポリンA; siRNA; HCV増殖複合体; Two-Hybrid法

免疫抑制剤であるサイクロスポリンA (CsA)は濃度依存性にC型肝炎ウイルス(HCV)レプリコン増殖を抑制し、その50%抑制濃度は臨床血中濃度域である0.5μg/mlであるが、CsAではインターフェロンでみられるような細胞内ISRE活性の上昇は認められず、そのHCV増殖抑制効果はインターフェロンとは独立した作用機構を介すると考えられた。CsAの細胞内受容体であるサイクロフィリンはこれまでもHIV Gag蛋白と結合し、その感染、増殖との関連性が報告されており、HCVの複製増殖にどれほど関与しているかを確認することは重要であり以下検討をすすめた。細胞質、及び小胞体(ER)に局在するサイクロフィリンA、B及びCに対するsiRNA発現ベクターによりノックダウン細胞を作成し、レプリコンの増殖効果を解析したところ、それぞれのサイクロフィリンの発現抑制によりレプリコン増殖は有意な抑制効果を認め、これらのサイクロフィリンがHCV増殖に関与していると考えられた。免疫抑制能の弱いサイクロスポリンDも同様のHCVレプリコン増殖抑制効果がみられ、サイクロスポリンの抗ウイルス効果はサイクロフィリンの活性阻害を介することが確認された。Two hybrid法では、HCV蛋白とサイクロフィリンA, BおよびCの直接会合は認めなかったため、ヒト肝臓cDNAライブラリーを用いて宿主蛋白の網羅的スクリーニングを行ったところ、サイクロフィリンと会合する蛋白がいくつか同定された。今回同定された蛋白のsiRNAによる発現抑制ではウイルス増殖は80%程度の抑制にとどまった。HCV蛋白とサイクロフィリンの直接相互作用は認められず、第3の分子の関与が推定されたが、サイクロフィリンと相互作用する宿主蛋白を同定することは、新たな抗ウイルス分子標的の同定・新規治療開発につながると考えられ現在研究を遂行中である。

Immunosuppressive medicine (CsA) inhibits the proliferation of hepatitis C virus (HCV) in a concentration-dependent manner,その50% inhibitory concentration はClinical blood concentration range である0.5μg/ml であるが、CsA ではインターフェロンでみられるようなRISE in intracellular ISRE activity はcognize められず、そのH The CV proliferation inhibitory effect is independent of the mechanism of action and the test of the CV growth inhibitory effect. CsA intracellular receptor HIV Gag protein binding, infection and proliferation related reporting, HCV replication Propagation of にどれほど关 and しているかをConfirmation of することはimportant でありThe following 検 Discussion of をすすめた. Cytoplasm, and small cell bodies (ER) are localized in するサイクロフィリンA, B, and びCに対するsi RNA ベクターによりノックダウンcellをproductionし、レプリコンのproliferation effectをanalysisしたところ、それぞれのサイクロフィリンの発新発によりレプリコン procreation は intend to suppress The control effect is the same as the control of HCV reproduction and the control of HCV infection. Immunosuppressive effect of weak HCV and proliferation inhibitory effect of HCVイクロスポリンのanti-ウイルス Effect はサイクロフィリンのActivity Blocking することがConfirmationされた. Two hybrid method, HCV protein protein A, BおよびCの Directly meet the は recognized めなかったため, ヒトLiver cDNA ライブラリーを Use いて host protein のThe スクリーニングを行ったところ of the snare, the サイクロフィリンと合するprotein がいくつか同定された. This time, we have determined that the siRNA of the same protein is now inhibiting the reproduction of the protein by 80%. The direct interaction between HCV protein and the third molecule is presumed, and the interaction between HCV protein and molecule is presumed. The host protein を することは and the new たなanti-ウイルス molecular target の同定・新regulated treatment are currently being studied and implemented.

项目成果

Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor 3

• DOI: 10.1007/s00535-006-1842-x
• 发表时间: 2006-08
• 期刊: Journal of Gastroenterology
• 影响因子: 6.3
• 作者: T. Yamashiro;N. Sakamoto;M. Kurosaki;N. Kanazawa;Y. Tanabe;M. Nakagawa;Cheng-Hsin Chen;Yasuhiro Itsui-Ya

高齢者C型慢性肝炎に対するインターフェロン療法の安全性と有効性

干扰素治疗老年慢性丙型肝炎的安全性和有效性

• 发表时间: 2007
• 作者: Yamashiro T;Nakagawa M;et al.;中川 美奈
• 通讯作者: 中川 美奈

Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR) modulates hepatitis C virus replication

• DOI: 10.1111/j.1365-2893.2006.00739.x
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JOURNAL OF VIRAL HEPATITIS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Kohashi, T.;Maekawa, S.;Watanabe, M.
• 通讯作者: Watanabe, M.

Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication

• DOI: 10.1111/j.1365-2893.2006.00732.x
• 发表时间: 2006-10-01
• 期刊: JOURNAL OF VIRAL HEPATITIS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Itsui, Y.;Sakamoto, N.;Watanabe, M.
• 通讯作者: Watanabe, M.

医学のあゆみ 別冊 消化器疾患ウイルス肝炎の発症機序 : HCVによるインターフェロン応答抑制機構

医学史特辑 消化道疾病病毒性肝炎发病机制：HCV干扰素反应抑制机制

• 发表时间: 2006
• 作者: 中川美奈;坂本直哉
• 通讯作者: 坂本直哉