頭頸部悪性腫瘍患者血漿FreeDNAにおけるLOH解析

头颈部恶性肿瘤患者血浆FreeDNA的LOH分析

基本信息

批准号：
18790926
负责人：
高木亮
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

頭頸部悪性腫瘍は、扁平上皮癌が多く見られるが、その他、腺様嚢胞癌、腺癌、悪性黒色腫など様々な組織型を認め、また、周囲に重要臓器が存在するため、進展例では治療が困難となる場合が多い。循環血液中には、細胞から遊離した状態のDNA(free DNA)が存在することが知られている。また、種々の腫瘍におけるヘテロ結合性の消失(以下LOH)に関する研究から、組織型別LOHのマイクロサテライト領域が判明している。この腫瘍細胞のLOHの局在情報を癌細胞の指紋と考え、循環血清中の腫瘍free DNAの検出を行った。2002年〜2006年までに当院を受診し、組織学的に悪性黒色腫・腺様嚢胞癌と診断された患者のうち、患者および家族に十分なインフォームドコンセントを行った上、同意の得られた16症例の血液サンプルを使用した。Dr.GenTLE(TaKaRa)を使用し、白血球から正常DNAを、QIAamp blood kit(QIAGEN)を使用し、血漿からfree DNAを抽出、PicoGreen(Molecular Probes)を用いて定量を行った。マイクロサテライト解析はジェネティックアナライザ3100(Applied Biosystems)を使用した。16症例中12症例において少なくとも1か所以上の遺伝子座位にLOHが認められた。4個のマイクロサテライトマーカーLOHが有意に認められ、それぞれDIS243、D6S311、D9S161、D19S246であった。本研究では、頭頸部粘膜悪性黒色腫および腺様嚢胞癌患者の血漿を試料とし、ジェネティックアナライザ3100を用いて癌に由来するDNAであることを検証し、特異的なマイクロサテライト領域の特定に成功した。循環腫瘍freeDNAを用いたLOH解析は、今後、癌のスクリーニング検査の有力な方法になり得る可能性があることを明らかにした。

在鳞状细胞癌中经常看到恶性头部和颈部肿瘤，但是还有其他各种组织学类型，包括腺样囊性癌，腺癌和恶性黑色素瘤，以及周围地区具有重要的器官，使得在进度病例中很难进行治疗。众所周知，血液循环中有游离DNA（游离DNA）。此外，在各种肿瘤中，关于异源特性的消失（以下称为LOH）的消失已经揭示了通过组织学的微卫星区域。该肿瘤细胞的LOH的定位信息被认为是癌细胞的指纹，并且在循环血清中检测到无肿瘤的DNA。在2002年至2006年期间访问我们医院并在组织学诊断的恶性黑色素瘤或腺样性囊性癌的患者中，在向患者及其家人提供了足够的知情同意后，使用了16例同意的16例同意的血液样本。使用柔和博士（Takara）从白细胞中提取正常的DNA，并使用Qiaamp Blood Kit（Qiagen）从血浆中提取正常DNA，并使用PICOGREEN（Molecular Probes）进行定量。使用遗传分析仪3100（Applied Biosystems）进行微卫星分析。在16例中的12例中，至少观察到LOH至少一个或多个遗传基因座。显着观察到了四个微卫星标记，分别是DIS243，D6S311，D9S161和D19S246。在这项研究中，我们使用了来自头颈粘膜恶性黑色素瘤和腺样性囊性癌患者的血浆样品，并使用遗传分析仪3100来验证它是癌症衍生的DNA，并成功鉴定出特定的微卫星区域。使用循环无肿瘤DNA的LOH分析表明，将来这可能是筛查癌症的一种有希望的方法。