メチル化診断チップによる肺癌の分子診断法の確立と発ガンリスク評価

肺癌分子诊断方法建立及甲基化诊断芯片癌症风险评估

• 批准号: 18790983
• 负责人: 遠藤 誠
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790983/
• 关键词: メチル化; 肺癌; メチル化診断チップ

1.メチル化診断チップの実験用プライマーの作製、定量、コントロール実験メチル化診断チップGenoPa1^<TM>(三菱レーヨン)注入用のプローブ、Cy5標識プライマー、リン酸化標識プライマー作製を行った。癌抑制遺伝子・癌関連遺伝子8遺伝子のプローブを作成し、同遺伝子のコントロール検体のmultiplex PCR産物から得られた検量線を求め、最適なプローブかどうかを検討した結果、最終的に4遺伝子(TIG1,p16,RUNX3,LOX)を評価可能と判断した。2.メチル化診断チップGenoPa1^<TM>を用いた肺癌手術検体のメチル化解析上記4遺伝子のうち、TIG1遺伝子のプローブを注入したメチル化診断チップGenoPa1^<TM>を用いてメチル化解析を行い、肺癌手術検体の臨床病理学的事項を検討した。対象:肺癌手術例50例(腺癌25例、扁平上皮癌25例)とその対応する非腫瘍組織において、TIG1遺伝子プロモーター領域近傍のメチル化をメチル化診断チップを用いて定量的に解析した。方法:手術検体からDNAを抽出、Bisulfite処理をしたものをPCRにて増複した。PCR産物を生成、strandase処理を行い、メチル化チップに搭載したプローべとハイブリダイゼーション、検出、解析した。解析はstandization curveからメチル化率を算出した。結果:肺扁平上皮癌では、腺癌と比較しTIG1遺伝子は高率にメチル化を認めた。肺腺癌ではTIG1のメチル化を認めなかった。肺非腫瘍組織ではTIG1のメチル化はみられず加齢とも関連がなかった。メチル化診断チップを用いたメチル化解析の結果と従来法のCOBRA踏法、MS-SNuPE法、bisulfite-SSCP法との結果比較を行い、定量性の評価が今後の課題である。

1。制备用于甲基化诊断芯片的制备，定量和对照实验引物，制备探针，Cy5标记的引物和磷酸化标记的引物，以注射甲基化诊断型芯片基因最好的基因普（MitsubishiSubishi Rayon）。我们为88个癌症抑制基因和与癌症相关的基因创建了一个探针，并获得了从同一基因的对照样品的多重PCR产物获得的校准曲线，并检查了探针是否是最佳的，并最终确定了四个基因（Tig1，p16，runx3，lox，lox）。 2。使用甲基化诊断CHIP Genopa1^<tm>对肺癌手术标本进行甲基化分析，在上述四个基因中，使用甲基化诊断芯片基因最好的甲基化分析进行了甲基化分析，并注入了TIG1基因的探针，以及TIG1基因的探针，以及临床病理病理学问题，且具有Lung Cancer cancer corpericals specimens sergical Specimens。受试者：在50例肺癌手术（25例25例腺癌和25例鳞状细胞癌病例）及其相应的非肿瘤组织中，使用甲基化诊断芯片定量分析Tig1基因启动子区域的甲基化。方法：从手术标本中提取DNA，并通过PCR添加甲硫酸氢盐治疗。生成PCR产物，并处理与安装在甲基化芯片上的探针进行杂交，检测和分析的股骨。甲基化速率是从站立曲线计算的，进行分析。结果：在肺鳞状细胞癌中，发现Tig1基因的甲基化速率高于腺癌。在肺腺癌中未观察到Tig1甲基化。在非肿瘤肺组织中未观察到Tig1甲基化，与衰老无关。使用甲基化诊断芯片进行甲基化分析的结果与常规的眼镜蛇法，MS-SNUPE方法和Bisulfite-SSCP方法进行了比较，并且对定量性的评估将是未来的挑战。

项目成果

Promoter hypermethylation of RASSF1A and RUNX3 genes as an independent prognostic prediction marker in surgically resected non-small cell lung cancers.

• DOI: 10.1016/j.lungcan.2007.05.011
• 发表时间: 2007-10
• 期刊: Lung cancer
• 影响因子: 5.3
• 作者: N. Yanagawa;G. Tamura;H. Oizumi;N. Kanauchi;M. Endoh;M. Sadahiro;T. Motoyama