メチル化診断チップによる肺癌の分子診断法の確立と発ガンリスク評価

肺癌分子诊断方法建立及甲基化诊断芯片癌症风险评估

• 批准号: 18790983
• 负责人: 遠藤 誠
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790983/
• 关键词: メチル化; 肺癌; メチル化診断チップ

1.メチル化診断チップの実験用プライマーの作製、定量、コントロール実験メチル化診断チップGenoPa1^<TM>(三菱レーヨン)注入用のプローブ、Cy5標識プライマー、リン酸化標識プライマー作製を行った。癌抑制遺伝子・癌関連遺伝子8遺伝子のプローブを作成し、同遺伝子のコントロール検体のmultiplex PCR産物から得られた検量線を求め、最適なプローブかどうかを検討した結果、最終的に4遺伝子(TIG1,p16,RUNX3,LOX)を評価可能と判断した。2.メチル化診断チップGenoPa1^<TM>を用いた肺癌手術検体のメチル化解析上記4遺伝子のうち、TIG1遺伝子のプローブを注入したメチル化診断チップGenoPa1^<TM>を用いてメチル化解析を行い、肺癌手術検体の臨床病理学的事項を検討した。対象:肺癌手術例50例(腺癌25例、扁平上皮癌25例)とその対応する非腫瘍組織において、TIG1遺伝子プロモーター領域近傍のメチル化をメチル化診断チップを用いて定量的に解析した。方法:手術検体からDNAを抽出、Bisulfite処理をしたものをPCRにて増複した。PCR産物を生成、strandase処理を行い、メチル化チップに搭載したプローべとハイブリダイゼーション、検出、解析した。解析はstandization curveからメチル化率を算出した。結果:肺扁平上皮癌では、腺癌と比較しTIG1遺伝子は高率にメチル化を認めた。肺腺癌ではTIG1のメチル化を認めなかった。肺非腫瘍組織ではTIG1のメチル化はみられず加齢とも関連がなかった。メチル化診断チップを用いたメチル化解析の結果と従来法のCOBRA踏法、MS-SNuPE法、bisulfite-SSCP法との結果比較を行い、定量性の評価が今後の課題である。

1. Production, quantification, measurement, and evaluation of diagnostic products for GenoPa1^<TM>(Mitsubishi) injection, Cy5 identification, and acidification identification. Cancer suppressor gene, cancer associated gene 8 gene expression vector was created, multiplex PCR products of the same gene expression vector were obtained, detection lines were obtained, optimal expression vector was obtained, and final 4 gene expression vector (TIG1,p16, RUNX3,LOX) was evaluated. 2. <TM>To investigate the clinical pathology of lung cancer surgical specimens, the following items are included: 1. To investigate the clinical pathology of lung cancer surgical specimens, 2. To investigate <TM>the clinical pathology of lung cancer surgical specimens. PARTICIPANTS: 50 lung cancer surgical cases (adenocarcinoma 25, squamous cell carcinoma 25) and the analysis of non-tumorous tissues by TIG1 gene transfer and quantitative analysis. Methods: DNA extraction from surgical specimens, Bisulfite treatment, and PCR were performed. PCR product generation, strandase processing, detection and analysis Analyze the standardization curve and calculate the standardization rate. Results: Compared with squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of lung, TIG1 gene had a high rate of metastasis. Adenocarcinoma of the lung: TIG1 The lung tissue is not affected by TIG1. The tissue is not affected by TIG 1. Comparison of the results of COBRA, MS-SNuPE and bisulfite-SSCP methods, quantitative evaluation and future issues

项目成果

Promoter hypermethylation of RASSF1A and RUNX3 genes as an independent prognostic prediction marker in surgically resected non-small cell lung cancers.

• DOI: 10.1016/j.lungcan.2007.05.011
• 发表时间: 2007-10
• 期刊: Lung cancer
• 影响因子: 5.3
• 作者: N. Yanagawa;G. Tamura;H. Oizumi;N. Kanauchi;M. Endoh;M. Sadahiro;T. Motoyama

Quantitative assessment of RUNX3 methylation in neoplastic and non‐neoplastic gastric epithelia using a DNA microarray

• DOI: 10.1111/j.1440-1827.2006.02010.x
• 发表时间: 2006-10
• 期刊: Pathology International
• 影响因子: 2.2
• 作者: K. So;G. Tamura;T. Honda;N. Homma;M. Endoh;N. Togawa;S. Nishizuka;T. Motoyama