破骨細胞の融合を制御する免疫グロブリン様膜タンパク質の機能解析

控制破骨细胞融合的免疫球蛋白样膜蛋白的功能分析

• 批准号: 18791038
• 负责人: 与語 圭一郎
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Shizuoka University (2007)Nara Institute of Science and Technology (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791038/
• 关键词: 破骨細胞; CD200; 細胞融合

前年度、CD200が破骨細胞の分化に伴い発現上昇すること、また、CD200の強制発現により細胞融合が促進することを示唆する結果が得られた。そこで本年度は、CD200の発現上昇メカニズムを調べるため、マウスCD200の予想プロモーター領域1.8kbを単離し、ルシフェラーゼを用いたプロモーター活性を調べたがプロモーター活性は認められず、さらに上流の領域が必要であると考えられた。次にCD200-CD200R1シグナルの機能阻害実験を行った。CD200の受容体であるCD200R1の細胞ドメインをFc融合型タンパク質として発現・精製し、この遊離型受容体によるCD200の機能阻害を試みた。RAW264細胞および骨髄マクロファージを用いた分化誘導系にこのタンパク質を加え、TRAP陽性破骨細胞数を調べたものの抑制効果は認められなかった。また、過去に破骨細胞の融合にCD47というCD200と同じ免疫グロブリン様ドメインを有する膜結合型リガンドが関与するとの報告があったことから、重複した機能を有しているのか確認した。しかしながら、CD47受容体(SIRPα)の中和抗体とCD200R1の遊離型受容体を同時に分化誘導系に添加しても、融合の抑制効果は認められなかった。一方、RAW264細胞においてCD200R1の発現をRNAiによって抑制したところ、細胞の生存・増殖を抑制する結果が得られた。以上、前年度の結果も考え合わせるとCD200-CD200R1シグナル系は、破骨細胞の融合には必須ではないものの、融合促進効果を有することが示唆された。この融合促進効果は、細胞の増殖・生存性と関連している可能性が考えられる。

In the previous year, CD200 increased the differentiation of osteoclasts, and CD200 stress increased the fusion of osteoclasts. This year, the CD200's development has increased, and the CD200's expected field is 1.8 kb. The CD200's development has increased, and the CD 200's expected field is 1.8 kb. The CD200-CD200R1 is a functional barrier to performance. CD200 receptor is the cell type of CD200R1, and the fusion type of CD200R1 is the cell type of CD200R1. RAW264 cell line was used to increase the number of TRAP-positive osteoclasts. In the past, osteoclast fusion CD47 and CD200 were identified as having membrane-bound, duplicative functions. CD47 receptor (SIRPα) neutralizing antibody and CD200R1 free receptor are simultaneously added to differentiation induction system, fusion inhibition effect is recognized. In one case, RAW264 cells were found to inhibit the expression of RNAi in CD200R1 and the survival and proliferation of cells. The results of the previous year showed that CD200-CD200R1 fusion was necessary for osteoclast fusion and fusion promotion. The fusion promotion effect, cell proliferation, survival and correlation are examined.

项目成果

Retrovirus-mediated conditional immortalization and analysis of established cell lines of osteoclast precursor cells.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.09.020
• 发表时间: 2006-11
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Shigehisa Kawata;Jun Suzuki;Masahiro Maruoka;Megumi Mizutamari;N. Ishida-Kitagawa;K. Yogo;P. Jat;T. Shishido

Negative autoregulation of RANKL and c-Src signaling in osteoclasts

• DOI: 10.1007/s00774-007-0751-2
• 发表时间: 2007-06
• 期刊: Journal of Bone and Mineral Metabolism
• 影响因子: 3.3
• 作者: K. Yogo;N. Ishida-Kitagawa;T. Takeya

Functional analysis of newly identified c-Src-binding proteins in osteoclastogenesis

新发现的 c-Src 结合蛋白在破骨细胞生成中的功能分析

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nippon Rinsho 65
• 作者: Yanagawa T;Watanabe H;Shinozaki T;Takagishi K.;Koga S
• 通讯作者: Koga S