人工染色体を用いたヒトKlotho遺伝子による機能再生医療技術の開発

我々は遺伝子治療用ヒト人工染色体ベクター(HAC)を作製しその実用化を目指している。細胞への導入効率の問題から、ウイルスベクターようなin vivoでの導入ではなく、幹細胞を用いた、ex vivoでの導入に焦点をあてている。幹細胞移植による遺伝子欠損に対する治療に向けて、この際問題となるのが幹細胞移植効率、生着率であるが、私は近年酸化ストレスに対する耐性能や幹細胞制御に重要なWntシグナルに関わることが報告されているKlotho遺伝子を、我々の作製した遺伝子治療への応用を目的としたヒト人工染色体ベクターに共搭載し、移植効率、治療効果向上を試みている。これまでに、CHO細胞内において、Klotho遺伝子をカバーするPACをヒト人工染色体に搭載しKlotho-HACを作製している。CHO細胞内においてKlotho遺伝子発現を確認していた。1.移植効率向上を検証するための移植細胞として間葉系幹細胞を選んだ。まずは、この細胞に何も搭載されていない空の人工染色体ベクターを導入し、長期培養における人工染色体ベクターの安定性について検証した。2.内在制御領域による遺伝子発現による効果と比較するために、Klotho遺伝子強制発現(膜貫通型、分泌型)プラスミドの人工染色体ベクターへの搭載を試みた。遺伝子発現量依存的に移植効率向上が認められるかKlotho PAC-HACとの比較検証を行うために、並行して同様の実験を進めている。3.細胞移植効率検証のために、さまざまな手技を考慮しながらマウスへの細胞移植の条件検討を行っている。4.移植効率向上が認められた際に治療を目的とした他の遺伝子も共搭載可能となるよう人工染色体ベクターを改変した。

我々は遺伝子治療用ヒト人工染色体ベクター(HAC)を作製しその実用化を目指している。細胞への導入効率の問題から、ウイルスベクターようなin vivoでの導入ではなく、幹細胞を用いた、ex vivoでの導入に焦点をあてている。幹細胞移植による遺伝子欠損に対する治療に向けて、この際問題となるのが幹細胞移植効率、生着率であるが、私は近年酸化ストレスに対する耐性能や幹細胞制御に重要なWntシグナルに関わることが報告されているKlotho遺伝子を、我々の作製した遺伝子治療への応用を目的としたヒト人工染色体ベクターに共搭載し、移植効率、治療効果向上を試みている。これまでに、CHO細胞内において、Klotho遺伝子をカバーするPACをヒト人工染色体に搭載しKlotho-HACを作製している。CHO細胞内においてKlotho遺伝子発現を確認していた。1.移植効率向上を検証するための移植細胞として間葉系幹細胞を選んだ。まずは、この細胞に何も搭載されていない空の人工染色体ベクターを導入し、長期培養における人工染色体ベクターの安定性について検証した。2.内在制御領域による遺伝子発現による効果と比較するために、Klotho遺伝子強制発現(膜貫通型、分泌型)プラスミドの人工染色体ベクターへの搭載を試みた。遺伝子発現量依存的に移植効率向上が認められるかKlotho PAC-HACとの比較検証を行うために、並行して同様の実験を進めている。3.細胞移植効率検証のために、さまざまな手技を考慮しながらマウスへの細胞移植の条件検討を行っている。4.移植効率向上が認められた際に治療を目的とした他の遺伝子も共搭載可能となるよう人工染色体ベクターを改変した。