人工染色体を用いたヒトKlotho遺伝子による機能再生医療技術の開発

利用人工染色体开发利用人类Klotho基因的功能性再生医学技术

• 批准号: 07J54212
• 负责人: 阿部 智志
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J54212/
• 关键词: ヒト人工染色体ベクター; Klotho遺伝子; 幹細胞移植; 間葉系幹細胞; 人工染色体ベクター

我々は遺伝子治療用ヒト人工染色体ベクター(HAC)を作製しその実用化を目指している。細胞への導入効率の問題から、ウイルスベクターようなin vivoでの導入ではなく、幹細胞を用いた、ex vivoでの導入に焦点をあてている。幹細胞移植による遺伝子欠損に対する治療に向けて、この際問題となるのが幹細胞移植効率、生着率であるが、私は近年酸化ストレスに対する耐性能や幹細胞制御に重要なWntシグナルに関わることが報告されているKlotho遺伝子を、我々の作製した遺伝子治療への応用を目的としたヒト人工染色体ベクターに共搭載し、移植効率、治療効果向上を試みている。これまでに、CHO細胞内において、Klotho遺伝子をカバーするPACをヒト人工染色体に搭載しKlotho-HACを作製している。CHO細胞内においてKlotho遺伝子発現を確認していた。1.移植効率向上を検証するための移植細胞として間葉系幹細胞を選んだ。まずは、この細胞に何も搭載されていない空の人工染色体ベクターを導入し、長期培養における人工染色体ベクターの安定性について検証した。2.内在制御領域による遺伝子発現による効果と比較するために、Klotho遺伝子強制発現(膜貫通型、分泌型)プラスミドの人工染色体ベクターへの搭載を試みた。遺伝子発現量依存的に移植効率向上が認められるかKlotho PAC-HACとの比較検証を行うために、並行して同様の実験を進めている。3.細胞移植効率検証のために、さまざまな手技を考慮しながらマウスへの細胞移植の条件検討を行っている。4.移植効率向上が認められた際に治療を目的とした他の遺伝子も共搭載可能となるよう人工染色体ベクターを改変した。

I 々 は heritage 伝 son treatment with ヒ ト artificial chromosome ベ ク タ ー (d) the を cropping し そ の be in turn を refers し て い る. Cell へ の import working rate の problem か ら, ウ イ ル ス ベ ク タ ー よ う な in vivo で の import で は な く, stem cell を い た, ex vivo で の import に focus を あ て て い る. Stem cell transplantation に よ る heritage 伝 son owe loss に す seaborne に る treatment to け て, こ の interstate problems と な る の が working rate, the rate of stem cell transplantation で あ る が, private は in recent years, acidification ス ト レ ス に す seaborne る patience can や stem cell suppression に important な Wnt シ グ ナ ル に masato わ る こ と が report さ れ て い る Klotho heritage 伝 を, I 々 の cropping し た 伝 son cure Cure へ の 応 purpose を と し た ヒ ト artificial chromosome ベ ク タ ー に carrying し, transplant services rate, total treatment services try fruit upward を み て い る. こ れ ま で に, CHO cells に お い て, traces of Klotho 伝 son を カ バ ー す る PAC を ヒ ト artificial chromosome に carry し Klotho - d を cropping し て い る. The presence of 伝 offspring of Klotho in CHO cells を confirms that <s:1> て た た た た た. 1. The transplantation efficacy is upward を検 evidence するため するため the transplanted cells と て mesenchymal stem cells を select んだ. ま ず は, こ に any も の cells carry さ れ て い な い empty の artificial chromosome ベ ク タ ー を import し, long-term cultivation に お け る artificial chromosome ベ ク タ ー の stability に つ い て 検 card し た. 2. The inner system of royal domain に よ る posthumous son 伝 発 now に よ る unseen fruit と compare す る た め に, traces of Klotho 伝 son forced 発 now (transmembrane, secretion) プ ラ ス ミ ド の artificial chromosome ベ ク タ ー へ の try carrying を み た. Posthumous son 伝 発 rate dependent に transplant services が up now recognize め ら れ る か Klotho PAC - d と の is 検 line card を う た め に, parallel し て with others の be 験 を into め て い る. 3. The rate of cell transplantation working card 検 の た め に, さ ま ざ ま な manipulation を consider し な が ら マ ウ ス へ の cell transplantation 検 の conditions for line を っ て い る. 4. Transplant services rate upward が recognize め ら れ た interstate に treatments を と し た his son の but 伝 も may carry と な る よ う artificial chromosome ベ ク タ ー を change - し た.

项目成果

Correction of a genetic defect in multipotent germline stem cells using a human artificial chromosome

• DOI: 10.1038/sj.gt.3303091
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: GENE THERAPY
• 影响因子: 5.1
• 作者: Kazuki, Y.;Hoshiya, H.;Oshimura, M.
• 通讯作者: Oshimura, M.

ヒト化P450マウス:薬物スクリーニングのためのヒト化CYP3Aクラスターを保持するマウスの作成

人源化 P450 小鼠：创建携带人源化 CYP3A 簇的小鼠用于药物筛选

• 发表时间: 2008
• 作者: 松田 貴文;Mesko Marcel;石川 智一;佐藤 淳;荻野 明久;永津 雅章;戸田淳仁;森山徹;有本 泰仁;香月康宏;香月康宏
• 通讯作者: 香月康宏