Rad18と53BP1が関与するDNA2重鎖切断に対する新たな細胞応答機構の解明

阐明涉及 Rad18 和 53BP1 的 DNA 双链断裂的新细胞反应机制

• 批准号: 18710047
• 负责人: 渡邉 健司
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710047/
• 关键词: Rad18; 53BP1; DNA2重鎖切断; 放射線

現在まで細胞に放射線などのDNA2重鎖切断を生じるダメージに応答して,Rad18が53BP1依存的にDNA2重鎖切断部位に集積することを明らかにした。さらに試験管内および細胞内で53BP1のあるフラグメントがRAD18によりモノユビキチン化されることを見いだした。ユビキチン化部位の決定53BP1のあるフラグメントの特定のリジン残基1個をアラニン残基に置換した変異53BP1タンパクを大腸菌に発現させ精製した。この変異タンパクはRAD18-RAD6によりモノユビキチン化されないことがわかった。現在同じ変異を導入した53BP1を細胞内に発現させモノユビキチン化されないことを確認中である。ユビキチン化の阻害がX線照射細胞応答へ及ぼす影響 RAD18欠損細胞はG1期において野生型細胞よりもX線感受性があることがわかった。またさらに53BP1との結合に重要なRAD18のZinc fingerドメインに変異を導入したタンパクをRAD18欠損細胞に安定的に発現する変異株を作製した。野生型RAD18を RAD18欠損細胞に安定的に発現する細胞株はG1期のX線感受性の回復が見られたが、このZinc fingerドメインに変異を導入したタンパクを発現する変異株ではX線感受性の回復は認められなかった。さらにこのG1期でのX線感受性がRAD18による53BP1のモノユビキチン化に関連しているかを確認するために RAD18のRAD6結合ドメインを欠損した変異タンパクをRAD18欠損細胞に安定的に発現する変異株を作製した。予想どおりこの変異株ではG1期のX線感受性の回復は認められなかった。これらのことより RAD18はX線照射されたG1期の細胞において53BP1をモノユビキチン化することによりDNAの2重鎖切断に対する細胞応答反応に関与していることがわかった。

Now ま で cells に radiation な ど の DNA2 heavy lock cut を raw じ る ダ メ ー ジ に 応 answer し て, Rad18 が 53 bp1 dependent に DNA2 heavy lock cut parts に set product す る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に test tube お よ び intracellular で 53 bp1 の あ る フ ラ グ メ ン ト が RAD18 に よ り モ ノ ユ ビ キ チ ン change さ れ る こ と を see い だ し た. ユ ビ キ チ ン change parts の decided to 53 bp1 の あ る フ ラ グ メ ン ト の specific の リ ジ ン residues 1 を ア ラ ニ ン residues に replacement し た - different 53 bp1 タ ン パ ク を coliform に 発 now さ せ refined し た. The <s:1> is a variation of タ (a) タ (a) パ (a) パ RAD18-RAD6 (a) によ (a) モノユビキチ (a) ization されな (a) とがわ (a) とがわ った). Now with じ - different を import し た 53 bp1 を intracellular に 発 now さ せ モ ノ ユ ビ キ チ ン change さ れ な い こ と を confirmed in で あ る. ユ ビ キ チ ン の resistance against が X-ray irradiation cells 応 a へ and ぼ す influence RAD18 owe damaged cells は G1 phase に お い て wild-type cells よ り も X-ray sensitivity が あ る こ と が わ か っ た. ま た さ ら に 53 bp1 と の combining に important な RAD18 の any Zinc finger ド メ イ ン に - different を import し た タ ン パ ク を RAD18 owe damaged cells に stable に 発 now す る - different strains を cropping し た. Wild type RAD18 を RAD18 owe damaged cells に stable に 発 now す る cell lines は G1 phase の X-ray sensitivity の reply が see ら れ た が, こ の any Zinc finger ド メ イ ン に - different を import し た タ ン パ ク を 発 now す る - different strains で は X-ray sensitivity の reply は recognize め ら れ な か っ た. さ ら に こ の G1 phase で の X-ray sensitivity が RAD18 に よ る 53 bp1 の モ ノ ユ ビ キ チ ン change に masato even し て い る か を confirm す る た め に RAD18 の RAD6 combining ド メ イ ン を owe loss し た - different タ ン パ ク を RAD18 owe damaged cells に stable に 発 now す る - different strains を cropping し た. It is expected that the <s:1> お of the <s:1> mutant strain で で the G1 stage <s:1> X-ray sensitivity <e:1> will be restored, and the められな った is recognized. こ れ ら の こ と よ り RAD18 は X-ray irradiation さ れ た G1 phase の cells に お い て 53 bp1 を モ ノ ユ ビ キ チ ン change す る こ と に よ り DNA の 2 heavy lock cut に す seaborne る cells 応 answer against 応 に masato and し て い る こ と が わ か っ た.

项目成果

Recognition of forked and single-stranded DNA structures by human RAD18 complexed with RAD6B protein triggers its recruitment to stalled replication forks

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2008.01176.x
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Tsuji, Yuri;Watanabe, Kenji;Tateishi, Satoshi
• 通讯作者: Tateishi, Satoshi

DNA2重鎖切断時におけるRAD18の役割

RAD18 在 DNA 双链断裂过程中的作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Tsuji;Y.;et. al.;渡邉健司
• 通讯作者: 渡邉健司