受容体活性化型チャネルの機能解明を目指したTRPチャネル拮抗剤の開発

开发 TRP 通道拮抗剂，旨在阐明受体激活通道的功能

• 批准号: 18750146
• 负责人: 清中 茂樹
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18750146/
• 关键词: TRPチャネル; 拮抗剤; アフィニティーラベル

昨年度に選択的なTRPチャネル拮抗剤が得られたので、アフィニティーラベル化を応用した新しいタンパク質修飾法を用いて拮抗剤の作用部位及び作用機構について検討した。具体的には以下の手順で行った。1)アフィニティーラベル化反応部位及びラベル化修飾が可能な官能基を有するピラゾール誘導体(ラベル化剤)の分子設計および合成 2)培養細胞内にこのラベル化剤を加えて光照射することによるチャネルのアフィニティーラベル化 3)ラベル化剤の修飾部位に標識剤(ビオチン)を選択的に修飾した。その際に用いる反応は、ケトンーヒドロキシアミンという、生体内には存在しない化学反応を用いているので、副反応を起こすことなくラベル化タンパク質だけをビオチン標識できた。4)TRPチャネルの抗体及びビオチンに対する抗体を利用したアフィニティー精製を行うことで、ラベル化されたTRPチャネルを得た。光アフィニティーラベル化の進行については、ウェスタンブロッティング法を用いて確認を行った。また、透過型電子顕微鏡を用いてチャネルに拮抗剤が直接結合していることも明らかにした。具体的にはラベル化後修飾ステップでビオチン標識を行い、アビジンを使ったアフィニティ精製後に標識タンパクの電子顕微鏡観察(ネガティブ染色)を行うという方法である。その結果を基に、チャネルの阻害機構及び活性化機構まで考察した。

The TRP antagonist selected last year has been investigated for its active site and active mechanism. The following is a list of specific actions. 1) Molecular design and synthesis of possible functional groups for the modification of reaction sites and reactions; 2) Molecular design and synthesis of inducers for reactions in cultured cells; 3) Molecular design and synthesis of selective modification sites for reactions in cultured cells. The chemical reaction in the organism is used in the reaction, and the secondary reaction occurs in the reaction. 4)TRP antibody production and the use of TRP antibody production The light source is used to confirm the progress of the process. The electron microscope of transmission type is used for direct combination of electron microscope and electron microscope The specific method of modifying the STATITEP logo after beading and the method of performing the electronic microscope inspection (dyeing) of the logo after refining the The results show that the inhibition mechanism and activation mechanism of the cell are investigated.

项目成果

Oligo-Asp Tag/Zn(II) complex probe as a new pair for labeling and fluorescence imaging of proteins

• DOI: 10.1021/ja0618604
• 发表时间: 2006-08-16
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Ojida, Akio;Honda, Kei;Hamachi, Itaru
• 通讯作者: Hamachi, Itaru

Three-dimensional reconstruction using transmission electron microscopy reveals a swollen, bell-shaped structure of transient receptor potential melastatin type 2 cation channel

• DOI: 10.1074/jbc.m705694200
• 发表时间: 2007-12-21
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Maruyama, Yuusuke;Ogura, Toshihiko;Sato, Chikara
• 通讯作者: Sato, Chikara

The TRPC3 channel has a large internal chamber surrounded by signal sensing antennas

• DOI: 10.1016/j.jmb.2006.12.043
• 发表时间: 2007-03-23
• 期刊: JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Mio, Kazuhiro;Ogura, Toshihiko;Sato, Chikara
• 通讯作者: Sato, Chikara

RIMl confers sustained activity and neurotransmitter vesicle anchoring to presynaptic Ca2+ channels.

RIM1赋予持续的活性和锚定于突触前Ca 2 通道的神经递质囊泡。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nature Neurosci. 10
• 作者: Kiyonaka S;wakamori M;Miki T;Uriu Y;Nonaka M;Bito H;Beedle AM;Mori E;Hara Y;De Waard M;Kanagawa M;Itakura M;Takahashi M;Campbeil KP & Mori Y
• 通讯作者: Campbeil KP & Mori Y

Mutation associated with an autosomal dominant cone-rod dystrophy CORD7 modifies RIMl-mediated modulation of voltage-dependent Ca2+ channels.

与常染色体显性锥杆营养不良相关的突变CORD7修饰RIM1介导的电压依赖性Ca 2 通道的调节。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Channels 1
• 作者: Miki T;Kiyonaka S;Uriu Y;De Waard M;Wakamori M;Beedle AM;Campbell KP;Mori Y
• 通讯作者: Mori Y