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新規の血管内皮前駆細胞活性化遺伝子導入による効率的な血管再生治療の開発

通过引入新型血管内皮祖细胞激活基因开发有效的血管再生治疗

基本信息

批准号：
18890159
负责人：
池田尚子
金额：
$ 1.77万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890159/
关键词：
循環器・高血圧再生医学

项目摘要

虚血性脳心血管疾患は日本人の最大の死因のひとつであるのみならず、救命できた後もその後遺症によって罹患患者のQOLを著しく低下させることが大きな問題である。そこで虚血性疾患に対する新しい治療法の開発が世界中で研究されており、VEGF, bFGFといった増殖因子の投与や骨髄・末梢血中の血管内皮前駆細胞の細胞移植が臨床応用可能となってきている。しかしながらその効果は限定的であり、より効果の高い治療法への改良が必要である。私たちは毛細血管内皮細胞に高い発現を示す新規アクチン結合蛋白を同定し、その血管内皮機能における役割を解明した。そこでこの遺伝子(GMFG)を血管内皮前駆細胞に過剰発現させてその機能を活性化し、より高い血管新生能を獲得させる研究を行った。まず始めにGMFGを発現していない血管内皮細胞株のC166にGMFGを恒常的に発現させてその内皮機能の検討を行った。GMFGの導入により、血管内皮細胞の遊走能は明らかに亢進したが、細胞増殖やアポトーシスは変化しなかった。次にヒスタミン、PMAに対する血管透過性の変化を検討した。GMFGを発現させることにより、低濃度ヒスタミン、PMA刺激後の細胞膜ラッフリングが亢進した。FITC-デキストランをトレーサーとして血管内皮透過性を調べたところ、やはり低濃度ヒスタミン、PMA刺激後の透過性が亢進していた。一方で高濃度のヒスタミン、PMA刺激後の細胞膜ラッフリングはGMFG発現により明らかに低下しており、トレーサー実験でも血管内皮透過性の有意な低下が認められた。以上よりGMFGは刺激応答アクチン重合を促進させることで血管内皮細胞遊走を亢進させ、さらに血管透過性の制御を行っていることが明らかとなった。次に、GMFGを血管内皮前駆細胞に導入するためのレトロウィルスの作成を行った。GMFGのcDNAをレトロウィルスバックボーンのプラスミドにサブクローニングした後にパッケージング細胞にトランスフェクションして上清中に分泌されたレトロウィルスを回収した。このレトロウィルスをまず培養細胞に感染させてGMFGの発現誘導を確認した。現在、ヒト末梢血より血管内皮前駆細胞を単離してGMFGをレトロウィルスを用いて遺伝子導入する準備を行っているところである。

Asthenic cardiovascular disease is the biggest cause of death in Japan and is a life-saving disease. The patients suffering from the sequelae of もその have low QOL and have a big problem.そこでHemorrhagic diseases に対する新しいtreatment の开発が中で Research されており、VEGF, It is possible that clinical application of bFGF proliferative factor can be clinically applied through cell transplantation of pre-endothelial cells in bone marrow and peripheral blood.しかしながらその Effect はLimited であり, よりeffect の高いtreatment method への IMPROVED がである. The function of capillary endothelial cells is high, and the function of endothelial cells is high and clear. GMFG has been shown to be highly functional and active in vascular endothelial pre-endothelial cells and has high angiogenic potential. The vascular endothelial cell line C166 GMFG is the constant source of endothelial function. The introduction of GMFG is good, the migration ability of vascular endothelial cells is high, and the cell proliferation is good. Sub-にヒスタミン, PMAに対するvascular permeabilityの変化を検した. GMFG を発成させることにより, low concentration ヒスタミン, cell membrane ラッフリングが hyperactive した after stimulation by PMA. FITC-Fluoroid vascular endothelial permeability testころ, やはりLow concentration ヒスタミン, permeability hypersensitivity after PMA stimulation. One party's high-concentration のヒスタミン and PMA-stimulated cell membrane ラッフリングはGMFG発成によりMing らかに low しており, トレーサー実験でも vascular endothelial permeability の intentional な low が cognizance められた. The above-mentioned GMFG stimulates the circulation of vascular endothelial cells and promotes the swimming of vascular endothelial cells. It can be used to control blood vessel permeability and control blood vessels. The introduction of GMFG and vascular endothelial pre-endothelial cells into the するためのレトロウィルスの成を行った. GMFGのcDNAをレトロウィルスバックボーンのプラスミドにサブクローニングした后にパThe supernatant of ッケージング cell にトランスフェクションて is secreted and されたレトロウィルスを is recycled.このレトロウィルスをまず Infection of cultured cells させてGMFG の発 is now induced and confirmed した. Now, the peripheral blood and vascular endothelial cells are isolated from the GMFG cells.ロウィルスを Use いて缝子 to import する to prepare を行っているところである.